Rab7通过其C末端依赖方式负向调控TLR-3信号转导通路

发布时间：2017-05-17 16:35

  本文关键词：Rab7通过其C末端依赖方式负向调控TLR-3信号转导通路，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：模式识别受体TLR受体家族中的TLR-3受体识别dsRN A,启动固有免疫应答。但异常或过度活化的TLR-3会导致生理功能紊乱和疾病的发生。Rab7是一类定位于晚期内体／溶酶体结构的小G蛋白,近年来的研究表明,Rab7参与了多种信号转导过程。关于Rab7对位于内体结构的TLR-3信号转导的调控研究甚少。本论文的目的是探讨Rab7对TLR-3激活后的天然免疫应答的信号转导的调控。方法：采用siRNA干扰RAW264.7细胞中Rab7基因,通过Real-time PCR检测Rab7基因沉默后TLR-3表达水平的变化。检测Rab7基因沉默后对PolyI：C诱导的TNF-α、IL-1β、IFN-α、 IFN-β与IP-10的表达的影响。通过Western blot检测MAPK信号转导通路ERK、JNK口p38的磷酸化水平。将Rab7的真核表达质粒和C末端缺失质粒Rab7△C转染RAW26.7田胞,建立稳定表达Rab7及其突变体的细胞系。以该细胞系为模型,PolyI:C刺激不同时间后检测TNF-α、IL-1β、 IFN-α、IFN-β与IP-10的表达。通过Western b lot检测MAPK信号转导通路的变化。结果：Rab7基因沉默后显著促进了TLR-3 mRNA的表达；促进了PolyI：C诱导的TNF-α、IL-1β、IFN-α、IFN-β和IP-10 mRNA的表达(p0.05)。Rab7基因沉默后促进了PolyI:C诱导的ERK和p38的磷酸化。Rab7过表达后显著抑制了PolyI:C诱导的TNF-α、IL-1β、IFN-α、IFN-β和IP-10 mRNA的表达,转染Rab7的突变体Rab7AC后显著了PolyI：C诱导的细胞因子的表达。Western Blot结果显示,Rab7基因的C末端缺失后显著促进了PolyI：C诱导的ERK、JNK、p38的磷酸化。结论：Rab7通过其C末端依赖的方式负向调控了TLR-3信号转导过程。
【关键词】：Rab7 TLR3 天然免疫 炎性因子 MAPK
【学位授予单位】：内蒙古农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要3-4
• 英文摘要4-8
• 1 引言8-14
• 1.1 固有免疫系统和Toll样受体8-10
• 1.1.1 固有免疫系统8
• 1.1.2 Toll样受体8
• 1.1.3 Toll样受体与病毒感染8-9
• 1.1.4 TLR-3激活后的信号转导9-10
• 1.2 Rab7蛋白简介10-12
• 1.2.1 Rab蛋白家族10-11
• 1.2.2 Rab711-12
• 1.3 巨噬细胞在抗病毒中作用12-13
• 1.4 Rab7与TLR-3激活后的信号通路之间关系的研究意义13-14
• 2 Rab7对PolyI：C刺激的TLR-3下游信号因子及小鼠巨噬细胞中MAPKs信号通路的影响14-32
• 2.1 实验材料14-16
• 2.1.1 细胞株及主要试剂14-15
• 2.1.2 实验仪器15
• 2.1.3 试剂配制15
• 2.1.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶与分离胶配制15-16
• 2.1.5 引物序列16
• 2.2 试验方法16-21
• 2.2.1 细胞培养16-17
• 2.2.2 质粒转染及稳定表达细胞株建立17
• 2.2.3 SiRNA转染RAW264.7细胞及处理17-18
• 2.2.4 PolyI：C刺激细胞18
• 2.2.5 细胞总RNA提取18
• 2.2.6 cDNA的制备18-19
• 2.2.7 Real-time PCR检测19-20
• 2.2.8 数据处理20
• 2.2.9 细胞蛋白提取及BCA法测定蛋白含量20
• 2.2.10 SDS-PAGE电泳20
• 2.2.11 蛋白杂交检测20-21
• 2.3 结果分析21-32
• 2.3.1 Rab7干扰后对PolyI：C激活的TLR-3下游细胞因子及MAPKs信号通路的影响21-28
• 2.3.2 Rab7 C末端缺失对PolyI：C激活的TLR-3下游细胞因子的变化及小鼠巨噬细胞中MAPKs信号通路的影响28-32
• 3 讨论32-33
• 4 结论33-34
• 5 展望34-35
• 致谢35-36
• 参考文献36-39
• 作者简介39

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 谢磊;夏靖燕;赵士芳;;Toll样受体3及其信号通路[J];国际口腔医学杂志;2008年S1期

2 蒋廷旺;吴传勇;张玲珍;陈燕;周晔;朱烨;谷明莉;陈波;邓安梅;仲人前;;PolyI:C诱导C57BL/6小鼠产生自身免疫样病变[J];临床军医杂志;2007年04期

3 杨蕾;闫红;董国凤;何莉;;MAPK信号通路对蟾蜍灵抑制Jurkat细胞增殖及诱导其凋亡的影响[J];实用药物与临床;2014年09期

4 常晓彤;辇晓峰;王振辉;;Toll样受体信号转导途径研究进展[J];生理科学进展;2011年05期

5 唐章文;戴文香;苏琦;;Toll样受体3与肿瘤的研究进展[J];中国现代医药杂志;2009年01期

6 王娜;王玉珍;万永青;谢基明;康鸿斌;刘春霞;;Rab7负向调控巨噬细胞中CpG诱导的细胞因子的表达[J];中国免疫学杂志;2012年08期

中国硕士学位论文全文数据库 前3条

1 王宁飞;Rab7负向调控巨噬细胞中TLR3/4信号转导通路的研究[D];内蒙古农业大学;2011年

2 吴英;TLR3信号通路在妊娠期高血压疾病发病机制中的作用[D];浙江大学;2013年

3 王怡;Toll样受体3抑制胰岛β细胞生长机制研究[D];南京医科大学;2012年

  本文关键词：Rab7通过其C末端依赖方式负向调控TLR-3信号转导通路，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：373900