钙化性纳米微粒致肾结石大鼠模型的建立及其致肾结石机制的初步研究

发布时间：2017-05-19 18:04

  本文关键词：钙化性纳米微粒致肾结石大鼠模型的建立及其致肾结石机制的初步研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:利用钙化性纳米微粒(calcifying nanoparticles,CNPs)建立肾结石大鼠模型;通过在建模过程的不同时间段检测大鼠尿液中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、骨桥蛋白(OPN)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的含量,初步分析CNPs致大鼠肾结石的形成机制,为临床肾结石患者的治疗和预防复发提供新的思路。方法:利用肾结石患者PCNL术中所得结石培养出的CNPs,制成CNPs混悬液。40只SD雄性大鼠随机分为4组:CNPs诱石组(A1、A2、A3组)、空白对照组(B组)。CNPs混悬液通过鼠尾静脉注射感染A组大鼠,B组大鼠经鼠尾静脉同时注射等量0.9%生理盐水。分别于注射后4小时、12小时、24小时、1周、2周及8周用代谢笼收集大鼠尿液,用ELISA方法检测各时间段大鼠尿液中的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、骨桥蛋白及单核细胞趋化蛋白-1的含量。分别于注射后1周、2周、8周分批次处死大鼠,肾脏组织Von Kossa染色加核固红复染后于光镜下鉴定造模是否成功,肾脏组织HE染色后于光镜下观察其结晶形成情况及病理改变,对照分析结晶的形成情况与大鼠尿液中NGAL、OPN、MCP-1的含量变化间的关系。结果:大鼠肾脏组织经过Von Kossa染色加核固红复染后在光镜下观察:注射后第8周时A组肾脏组织内可见散在不规则分布的黑褐色或者棕褐色钙盐晶体,主要分布于近曲小管和远曲小管;b组大鼠肾脏组织内未见明显钙盐结晶,故鉴定cnps致肾结石大鼠模型建立成功。在注射后4小时,a组的ngal水平(1913.46?223.23ng/l)与b组的ngal水平(1583.54?57.49ng/l)比较即开始增高(p0.05),而a组的opn(18.99?2.22μg/l)、mcp-1(457.70?3.50ng/l)水平相比于b组的opn(15.59?2.30μg/l)、mcp-1(437.07?6.82ng/l)水平则无明显差异(p0.05);在注射后第2周,a组的opn(28.00?2.69μg/l)、mcp-1(573.78?50.22ng/l)水平相比于b组的opn(16.40?1.54μg/l)、mcp-1(525.92?29.95ng/l)水平开始出现大幅度升高(p0.05);在注射后第8周,a组的ngal(3978.85?810.81ng/l)、opn(33.35?10.93μg/l)、mcp-1(734.07?201.47ng/l)含量相比于b组的ngal(1642.58?109.75ng/l)、opn(18.56?2.93μg/l)、mcp-1(534.81?51.14ng/l)含量均显著增高(p0.05)。与注射cnps后4小时大鼠尿液中ngal水平相比,a组中ngal水平变化随着时间的增加呈上升趋势(p0.05);与注射cnps后4小时大鼠尿液中opn、mcp-1水平相比,2周前a组大鼠尿中opn、mcp-1水平呈缓慢升高状态,无统计学意义(p0.05),2周后a组大鼠尿液中opn、mcp-1水平开始大幅度增高,8周时a组大鼠尿液中opn、mcp-1水平增至最高(p0.05)。大鼠肾脏经he染色后置于光镜下观察:注射后第1周,a组大鼠肾脏组织可见少量肾小管上皮细胞颗粒样变性,肾小管内未见钙盐晶体沉积;注射后第2周时,a组大鼠肾小管内可见少量钙盐晶体沉积,伴有少数肾小管上皮细胞颗粒样变性和空泡样变性;注射后第8周时,A组肾小管内可见大量钙盐晶体沉积,伴有广泛肾小管上皮细胞空泡样变性;B组肾脏组织未见钙盐沉积和病理改变。注射CNPs1周后,随着肾小管上皮细胞损伤的加重,A组大鼠尿液中NGAL水平也不断升高,同时肾小管内钙盐晶体的沉积量也随肾小管上皮细胞损伤的加重而增多;注射CNPs2周后A组大鼠尿液中的NGAL、OPN、MCP-1含量均随着肾小管内钙盐晶体的沉积量增加而不同程度地升高。结论:CNPs感染大鼠后可以诱导大鼠肾脏内钙盐晶体的生成和聚集,最终导致大鼠产生肾结石;CNPs在感染大鼠4小时后即开始损伤肾小管上皮细胞;2周后肾小管内开始出现钙盐晶体的粘附和聚集,OPN参与其粘附和聚集过程,并且钙盐晶体的沉积量随损伤程度的加重也相应增加,不断增多的钙盐晶体能刺激大鼠肾脏组织表达更多的MCP-1。
【关键词】：肾结石 钙化性纳米微粒 中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白 骨桥蛋白 单核细胞趋化蛋白-1
【学位授予单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R-332;R692.4
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 前言10-12
• 材料与方法12-18
• 结果18-24
• 讨论24-31
• 结论31-32
• 参考文献32-42
• 英汉缩略词对照表42-43
• 致谢43-44
• 综述 钙化性纳米微粒及其与肾结石相关的研究进展44-64
• 参考文献55-64

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