抗体纯化工艺中蛋白与配基相互作用的研究

发布时间：2017-05-26 03:05

  本文关键词：抗体纯化工艺中蛋白与配基相互作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：针对治疗型单克隆抗体纯化工艺中的关键问题,本论文利用表面等离子体共振(SPR)技术研究了疏水电荷诱导层析(HCIC)配基与抗体蛋白质的相互作用,对于表面和溶液的多种因素对相互作用的影响进行了考察。采用自组装技术在金衬底上构建了两种不同密度的HCIC配基表面模型。分别利用X射线光电子能谱(XPS)、X射线吸收精细结构(NEXAFS)、接触角和表面等离子体共振(SPR)对表面化学与结构、离子化和蛋白质结合进行了考察。采用SPR技术系统研究配基密度和溶液因素(如盐浓度、pH值)对抗体和白蛋白吸附的影响。我们的实验结果表明,配基密度对相互作用的热力学和动力学都有影响。值得注意的是,高配基密度能够提高结合强度,增大吸附速率,降低解离速率并会导致特异性降低。在中性条件下,疏水作用和氢键作用都对蛋白质吸附有很大的贡献,而在酸性条件下则会被静电排斥力超过。此外,本论文通过利用配基对铁磁性纳米颗粒进行修饰构建了新颖的抗体蛋白分离体系,该体系易于小量、快速分离抗体,对抗体具有一定的特异性吸附能力。以上抗体-配体相互作用的研究将有力支撑和推动单克隆抗体分离纯化工艺的优化。
【关键词】：疏水电荷诱导层析 表面等离子体共振 抗体 配基密度 相互作用
【学位授予单位】：大连理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392;Q51
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 引言9-11
• 1 绪论11-22
• 1.1 抗体11-12
• 1.1.1 抗体的结构11
• 1.1.2 单克隆抗体药物的发展11-12
• 1.2 抗体的分离纯化方法12-15
• 1.2.1 亲和层析12-13
• 1.2.2 离子交换层析13-14
• 1.2.3 疏水相互作用层析14
• 1.2.4 羟基磷灰石层析14-15
• 1.3 疏水性电荷诱导层析原理与应用15-17
• 1.3.1 原理15
• 1.3.2 应用和工艺优化15-16
• 1.3.3 疏水性电荷诱导层析的机理研究16-17
• 1.4 本论文应用的研究工具17-21
• 1.4.1 生物传感器18-20
• 1.4.1.1 表面等离子体共振18-19
• 1.4.1.2 石英晶体微天平19-20
• 1.4.2 X射线光电子能谱20
• 1.4.3 自组装单分子膜20-21
• 1.5 本论文研究内容21-22
• 2 MEP自组装表面的制备与表征22-34
• 2.1 引言22-23
• 2.2 实验材料与仪器23-24
• 2.2.1 材料和试剂23
• 2.2.2 溶液配制方法23
• 2.2.3 主要仪器23-24
• 2.3 试验方法24-26
• 2.3.1 金衬底的制备24
• 2.3.2 两种MEP表面模型的制备24-26
• 2.3.2.1 DVS-MEP自组装表面的制备25
• 2.3.2.2 MEP-only自组装表面的制备25-26
• 2.3.3 接触角测量26
• 2.3.4 X射线光电子能谱(XPS)26
• 2.3.5 X射线吸收精细结构(NAXAFS)26
• 2.4 实验结果与讨论26-33
• 2.4.1 XPS和NEXAFS对MEP表面的表征26-32
• 2.4.2 接触角对MEP表面的表征32-33
• 2.5 小结33-34
• 3 利用SPR对HCIC配基-抗体之间的相互作用的研究34-46
• 3.1 引言34
• 3.2 实验材料与仪器34-35
• 3.2.1 材料和试剂34
• 3.2.2 溶液配制方法34
• 3.2.3 主要仪器34-35
• 3.3 试验方法35-36
• 3.3.1 SPR光谱学35
• 3.3.2 吸附热力学和动力学分析35-36
• 3.4 实验结果与讨论36-44
• 3.4.1 利用SPR蛋白吸附对MEP表面进行表征36-38
• 3.4.2 配基密度对相互作用的影响38-42
• 3.4.3 盐浓度对相互作用的影响42-43
• 3.4.4 溶液pH对相互作用的影响43-44
• 3.5 小结44-46
• 4 基于铁磁性纳米颗粒的抗体纯化研究46-54
• 4.1 引言46
• 4.2 实验材料与仪器46-48
• 4.2.1 材料和试剂46-47
• 4.2.2 溶液配制方法47-48
• 4.2.3 主要仪器48
• 4.3 试验方法48-50
• 4.3.1 磁性纳米颗粒的修饰48-49
• 4.3.2 外光谱分析49
• 4.3.3 抗体吸附实验49
• 4.3.4 SDS-PAGE凝胶电泳49-50
• 4.4 实验结果与分析50-53
• 4.4.1 红外光谱表征50-51
• 4.4.2 抗体吸附实验结果51-53
• 4.5 小结53-54
• 5 总结54-55
• 参考文献55-63
• 附录A 英文缩略词释义63-64
• 攻读硕士学位期间发表学术论文情况64-65
• 致谢65-66

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 程慧,黄朝峰,段子渊;SPR生物传感器及其应用进展[J];中国生物工程杂志;2003年05期

  本文关键词：抗体纯化工艺中蛋白与配基相互作用的研究，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：395595