沉默IFN-γR表达对大鼠BMMSCs免疫调节能力的影响

发布时间：2024-04-24 22:17

　　目的:通过沉默大鼠骨髓间充质干细胞(BMMSCs)干扰素γ受体(IFN-γR)基因表达,研究抑制IFN-γ信号通路对大鼠BMMSCs免疫调节能力的影响。方法:根据大鼠IFN-γR基因序列,构建沉默IFN-γR基因的重组慢病毒shIFNγR-LV,并转染大鼠BMMSCs,沉默大鼠BMMSCs的IFN-γR基因表达;混合淋巴细胞培养实验分别检测对照组、BMMSCs阴性对照(BMMSC-NC)组和BMMSC-shIFNγR组淋巴细胞的活力和炎症因子浓度。结果:构建的慢病毒shIFNγR-LV能显著降低大鼠BMMSCs的IFN-γR mRNA表达;混合淋巴细胞培养实验显示,相对BMMSC-NC组,BMMSC-shIFNγR组抑制淋巴细胞活力的作用减弱(P<0.05)。混合淋巴细胞培养体系中,BMMSC-NC组肿瘤坏死因子α浓度低于BMMSC-shIFNγR组,而白细胞介素10浓度高于BMMSC-shIFNγR组(P<0.05)。结论:利用RNA干扰技术能有效沉默大鼠BMMSCs的IFN-γR基因表达,并能显著降低BMMSCs的调节免疫功能。

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【文章目录】：
材 料 和 方 法
    1 动物及细胞
    2 主要试剂
    3 主要方法
        3.1大鼠BMMSCs的分离、培养和鉴定
        3.2目的干扰片断的选择
        3.3 sh IFNγR-LV慢病毒载体的构建
        3.4慢病毒滴度测定
        3.5慢病毒感染大鼠BMMSCs
        3.6慢病毒感染大鼠BMMSCs后IFN-γR mRNA的real-time PCR检测
        3.7 BMMSCs和脾淋巴细胞的混合培养
        3.8标本的收集和检测
    4 统计学处理
结 果
    1 shIFNγR-LV慢病毒载体的构建
    2 shIFNγR-LV慢病毒滴度测定
    3 慢病毒稳定转染大鼠BMMSCs
    4 shIFNγR-LV下调BMMSCs的IFN-γR mRNA表达
    5 混合淋巴细胞反应
    6 混合淋巴细胞反应系统TNF-α和IL-10浓度的分析
讨 论



本文编号：3963580