人MBL的突变型哺乳细胞表达和野生型原核表达的研究

发布时间：2024-04-25 05:44

　　甘露聚糖结合凝集素(mannan-binding lectin，MBL)是C型凝集素超级家族中胶凝素家族成员。它可选择性识别多种病原体表面的糖结构，以不依赖抗体和C1q的方式激活补体，发挥溶破和间接调理功能，还能与吞噬细胞胶凝素受体结合而起直接调理作用。已发现3个可引起免疫缺损的MBL结构基因点突变——CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA，其编码产物氨基酸均发生改变，可导致血清MBL水平低下。这些等位基因为常染色体共显性遗传，人群中其基因频率高得令人惊奇，最高者竟达0.29，我国汉族GGC54GAC频率约0.1。显然，MBL缺损是迄今所发现的最常见的免疫缺损病。人群中不明原因反复感染的发病率很高，其最可能病因就是MBL基因突变引起的免疫缺损，但发病机理未明。 本实验室近几年的工作主要是MBL缺损，其中一个重要方面就是MBL缺损发病机理的研究，意欲重点阐明2个问题：MBL基因突变如何引起血清MBL水平低下?突变MBL蛋白的功能有否缺陷? 本实验以GGC54GAC MBL突变为研究对象，选用真核表达质粒pCI-neo，根据已构建好的含54位密码子突变型MBL...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图254位密码突变型MBL基因的PCR产物Fig.2PCRProduetofPGEM一MBLD

54位密码突变型MBL基因的ig.2PCRProduetofPGEM一MRI+Hind111marker，2:PCRProduet粒及其酶切鉴定l双酶切PCR产物、PCI一neo质一blue，获得30多阳性克隆，经Sa图3，可见约5.4kb和763bP的为54位密码突变MBL基因....

图3pCI一neo一MBL54的pCR及酶切鉴定

图254位密码突变型MBL基因的PCR产物Fig.2PCRProduetofPGEM一MBLDdaDNA尼eoRI+Hind111marker，2:PCRProduetofPGEM一MBLo二)重组质粒及其酶切鉴定Sall、Smal双酶切PCR产物、PCI一neo质粒，T4连接酶....

图4pel一neo一MBLs4质粒酶切鉴定Fig.4TherestrietionmaPofPCI一neo一MBL54

andPCI一neoDNA甩eoRI+Hind111Marker，2:ProductofPGEM一MBL54L54/Sall+Smal，4:PCI一neo，5:PCI一neo一MBL54，6:PCI一MBL54/Sall，8:lambdaDNA尼eoRI+Hind111marke....

图5脂质体转染前的csoaw细胞Fig:SCHO-dhfrce山before加nsfeetion

二、细胞转染复苏cHo一dhfr‘细胞，培养至活力最佳状态，计数1一3xl护个细胞转入6孔板中培养，待80%贴壁生长(约12h，见图5)，取约10雌重组质粒pCI一neo一MBL54DNA(约5林l)和10协1Lipofectamine，同时作不加质粒的CHO一dhfr’细胞转染....

本文编号：3964094