基于重组水疱性口炎病毒载体的寨卡疫苗构建及免疫原性评价

发布时间：2024-06-07 03:47

　　目的建立表达寨卡病毒E蛋白或含prM蛋白的G蛋白缺失型重组水疱性口炎病毒(rVSV)载体疫苗,评价其免疫效果。方法选取E蛋白或含prM蛋白基因,分别构建入prVSVΔG和prVSV骨架质粒,通过反向遗传学操作得到2种缺失VSV-G蛋白的重组病毒疫苗(rVSV△G-E、rVSV△G-prM-2A-E)和2种含VSV-G蛋白的重组病毒疫苗(rVSV-E、rVSV-prM-2A-E),免疫BALB/c小鼠后进行体液免疫及细胞免疫水平检测,比较4种重组病毒疫苗免疫差异。结果 rVSV△G-prM-2A-E免疫后诱导产生的特异性抗体与rVSV-prM-2A-E免疫后抗体水平相当(P>0.05),但显著高于rVSV△G-E免疫组(P<0.05);rVSV△G-prM-2A-E免疫诱导产生的中和抗体略高于rVSV△G-E和rVSVE免疫组,但低于rVSV-prM-2A-E免疫组;4种重组疫苗免疫后能有效诱导细胞分泌淋巴细胞因子白细胞介素-2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)产生,但诱导产生的IFN-γ水平无显著差异(P>0.05);rVSV△G-prM-2A-E及rVSV△G-...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 重组骨架载体的构建
        1.2.2 重组病毒包装及扩增
        1.2.3 重组病毒鉴定
        1.2.4 重组病毒疫苗免疫小鼠
        1.2.5 小鼠体液免疫和细胞免疫检测
        1.2.6 重组病毒疫苗免疫血清的中和抗体测定
    1.3 统计学方法
2结果
    2.1重组骨架载体构建及序列鉴定
    2.2重组病毒疫苗包装及扩增
    2.3重组病毒疫苗鉴定
        2.3.1 RT-PCR鉴定重组病毒基因组
        2.3.2重组病毒疫苗中外源蛋白表达鉴定
        2.3.3间接免疫荧光法检测病毒蛋白在感染细胞中的定位
        2.3.4体外生长动力学实验
        2.3.5重组病毒疫苗对小鼠体质量影响
        2.3.6重组病毒疫苗免疫血清中特异性抗体检测
        2.3.7细胞因子IL-2、IFN-γ检测
        2.3.8中和抗体检测
3讨论



本文编号：3990734