海藻酸钠/乙二醇壳聚糖双网络水凝胶对小鼠调节性T细胞免疫功能的影响

发布时间：2025-01-05 21:35

　　 目的探讨海藻酸钠(Alg)/乙二醇壳聚糖(GC)双网络凝胶材料体外刺激对小鼠调节性T细胞(Treg)免疫功能的影响。方法制备Alg、GC单网络水凝胶材料及双网络(DN)水凝胶材料(Alg/GC),根据不同水凝胶材料将细胞分为Alg组、GC组、DN组及对照组。采用免疫磁珠分离法分选BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+Treg,应用流式细胞术分析Treg叉头翼状螺旋转录因子(Foxp3)及细胞毒性T细胞相关抗原(CTLA-4)在不同时效(刺激24h或48h)、不同培养环境[有无多黏菌素B(PMB)]下的表达水平,以确定后续细胞培养时间以及是否选用含PMB的培养基;观察Treg与效应T细胞共培养后T细胞增殖活性改变;采用酶联免疫吸附分析(ELISA)技术检测Treg分泌白细胞介素(IL)-10、转化生长因子(TGF)-β及效应T细胞分泌IL-2、IL-4与干扰素(IFN)-γ的水平。结果选定实验条件为刺激24h,并使用含PMB的培养基。Alg/GC双网络水凝胶及GC单网络水凝胶作用24h后,与对照组[CTLA-4 (47.73±5.35)%,TGF-β(558.75±48.58)pg/ml...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验动物与试剂
    1.2 支架材料的制备
    1.3 内毒素检测
    1.4 小鼠脾脏细胞分离与单个核细胞制备
    1.5 Treg分离与鉴定
    1.6 细胞培养及分组
    1.7 CD4+CD25+Treg细胞存活率及各功能指标检测
    1.8流式细胞术检测CD4+CD25+Treg中Fox p3及CTLA-4的表达
    1.9 ELISA法检测细胞因子分泌水平
    1.1 0 C F S E法检测效应T细胞增殖活性
    1.1 1 统计学处理
2 结果
    2.1 CD4+CD25+Treg细胞存活率及各功能指标检测结果
    2.2 各水凝胶材料对CD4+CD25+Treg分泌IL-10和TGF-β的影响
    2.3 各水凝胶材料刺激下C D 4+C D 2 5+Tr e g对Te f f s增殖及T h 1/T h 2分化的影响
3 讨论



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