TGF-β1/Smad3信号通路调控小鼠成釉细胞Amelotin启动子转录活性的研究

发布时间：2025-04-18 03:34

　　 目的:研究TGF-β1/Smad3信号通路对调控小鼠成釉细胞Amelotin启动子转录活性的影响。方法:首先利用双荧光素酶报告基因检测系统分析TGF-β1和Smad3对小鼠Amelotin启动子转录活性的影响;然后利用染色体免疫共沉淀(ChIP)方法观察Smad3与Amelotin启动子特异性结合位点之间的相互作用;最后利用基因定点突变构建Smad3结合位点突变型Amelotin启动子,并用双荧光素酶报告基因检测系统分析TGF-β1和Smad3对野生型和突变型Amelotin启动子转录活性的影响。结果:TGF-β1和Smad3作用于成釉细胞后,Amelotin启动子转录活性明显增强(P<0.05);Smad3与Amelotin基因启动子的"AGAC"及"GTCT"序列有相互作用;将Amelotin启动子上Smad3结合位点特征性序列突变为"TGTC"和"GACA"后,TGF-β1和Smad3对突变型Amelotin基因启动子转录活性的影响较野生型明显减弱(P<0.05)。结论:TGF-β1/Smad3信号通路通过作用于Smad3结合位点调控成釉细胞Amelotin基因启动子...

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【文章目录】：
1 材料和方法
    1. 1 主要材料
    1. 2 细胞培养
    1. 3 TGF-β1、T204D、Smad3 对小鼠Amelotin启动子(-1463 ~ + 196) 转录活性影响的观察
        1. 3. 1 实验分组和质粒转染
        1. 3. 2 双荧光素酶报告基因检测
    1. 4 Ssmad3 与Amelptin启动子特异性结合位间的相互作用观察
    1. 5 小鼠Amelotin基因启动子特征性序列的定点突变
    1. 6 双荧光素酶报告检测TGF-β1 和Smad3 对野生型和突变型Amelotin基因启动子转录活性的影响
    1. 7 统计学分析
2 结果
    2. 1 TGF-β1、T204D及Smad3 对小鼠Amelotin基因启动子转录活性的影响
    2. 2 Smad3 与Amelotin启动子特异性结合位点之间的相互作用
    2. 3 小鼠Amelotin基因启动子特征性序列的定点突变及荧光素酶报告质粒的构建
    2. 4 TGF-β1、Smad3 对野生型和突变型Amelotin基因启动子转录活性的影响
3 讨论



本文编号：4040459