活化型肝星状细胞中miRNA下调Gremlin1表达的调控机制研究
本文关键词：活化型肝星状细胞中miRNA下调Gremlin1表达的调控机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。
【摘要】：目的：miRNA在控制发育进程、细胞分化、细胞凋亡以及器官发育等扮演着关键性角色，本课题组前期研究确认了下调Gremlin1的表达可抑制HSC-T6的活化，进而逆转CCL4诱导的SD大鼠肝纤维化模型的纤维化进程。本课题的研究目的主要是筛选并确认HSC-T6中下调Gremlin1表达的miRNA，以及该miRNA抑制HSC活化的能力。 方法：（1）运用生物信息学软件筛选出可能下调Gremlin1表达的miRNA；（2）用荧光素酶报告基因分析法将Gremlin1的mRNA的3′-UTR全长及部分片段转染HSC-T6，通过荧光素酶的活性筛选下调Gremlin1表达的miRNA的结合区域；（3）结合生物信息学软件和荧光素酶报告基因分析法筛选可能下调Gremlin1表达的miRNA；（4）合成筛选出的miRNA Mimic，将其转染HSC-T6中，通过western blot方法验证miRNA对Gremlin1的下调作用，以及对肝纤维化相关基因（胶原蛋白、TGF-β、α-SMA）表达的影响。 结果：（1）运用生物信息学软件筛选出可能下调Gremlin1表达的6种保守miRNA；（2）用荧光素酶报告基因分析法筛选出下调Gremlin1表达的miRNA的结合区；（3）结合生物信息学软件和荧光素酶报告基因分析法筛选可能下调Gremlin1表达的保守miRNA有：miR-23a/b、miR-27a/b、miR-181a/b/c/d和miR-182；（4）合成筛选出的miRNA Mimic，转染HSC-T6后，确认了miR-23b-3p、miR-27b和miR-182能下调HSC-T6中Gremlin1的表达；miR-181b-1-3p能下调Collα1和Col1α2的表达；（5）miR-27b既能下调HSC-T6中Gremlin1的表达，又能下调HSC-T6中α-SMA、TGF-β、Col1α1和Col1α2的表达。 结论：Gremlin1通过调节BMP-7/TGF-β-Smad信号通路，对HSC的活化起着促进作用，下调Gremlin1的表达可抑制HSC的活化，miR-27b、miR-23b-3p和miR-182能下调Gremlin1的表达；miR-27b能抑制HSC的活化。
【关键词】：miRNA Gremlin1 肝星状细胞 肝纤维化
【学位授予单位】：三峡大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R575.2;R-332
【目录】：
- 内容摘要4-5
- Abstract5-8
- 英文缩略词表8-9
- 引言9-12
- 材料与方法12-23
- 结果23-44
- 第一部分:生物信息学分析可能下调 Gremlin1 表达的 miRNA23
- 第二部分:荧光素酶报告基因分析法确定下调 Gremlin1 表达的 miRNA结合区23-35
- 第三部分:结合生物信息学和荧光素酶报告基因分析法筛选出可能下调Gremlin1 表达的 miRNA35-36
- 第四部分:确认肝星状细胞中能够下调 Gremlin1 表达的 miRNA 及其抑制HSC 活化的能力36-44
- 讨论44-46
- 小结46-47
- 参考文献47-49
- 综述49-62
- 参考文献57-62
- 后记62-63
- 附录63
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