猪囊尾蚴膜联蛋白的原核表达及其免疫反应性分析

发布时间：2017-06-04 10:21

  本文关键词：猪囊尾蚴膜联蛋白的原核表达及其免疫反应性分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:对猪囊尾蚴AF239799-1膜联蛋白基因进行高效原核表达,对表达产物进行免疫反应性分析。方法:通过DNA自动合成仪,用固相亚磷酸酰胺法合成一段5’端有NdeⅠ内切酶位点,3’端有XhoⅠ内切酶位点的猪囊尾蚴AF239799-1基因序列,并将其克隆到原核表达载体p ET28a(+)中,将其转入到感受态大肠杆菌BL21(DE3)中,经PCR、双酶切及基因测序鉴定,确定阳性克隆菌。用1.0m M IPTG对阳性克隆菌进行诱导表达,用SDS-PAGE(十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)对表达产物进行鉴定,并用蛋白质印迹法对纯化后的重组蛋白进行免疫反应性分析。结果:合成的基因序列长度为1 053 bp,AF239799-1重组蛋白为370个氨基酸,理论分子质量、等电点分别为40.39 k Da和6.33;PCR、双酶切及基因测序鉴定结果显示,p ET28a(+)-AF239799-1重组质粒构建成功,并成功转化到大肠杆菌BL21(DE3)中;重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中主要以包涵体形式表达;Western blot结果显示重组蛋白可被猪带绦虫病猪血清识别。结论:猪囊尾蚴AF239799-1膜联蛋白基因可在原核表达体系中获得高效表达,表达产物具有免疫反应性。
【关键词】：猪囊尾蚴 膜联蛋白 原核表达 免疫反应性
【学位授予单位】：贵阳医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-7
• 略缩词表7-8
• 引言8-10
• 材料与方法10-29
• 结果29-40
• 讨论40-42
• 结论42-43
• 参考文献43-46
• 综述46-54
• 参考文献51-54
• 作者简历54-55
• 致谢55-56
• 学位论文数据集56

【参考文献】

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本文编号：420735