水痘减毒活疫苗细胞工厂工艺研究

发布时间：2017-06-05 09:02

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【摘要】：目的通过对细胞工厂工艺制备水痘减毒活疫苗的关键工艺参数的优化,制备原液和成品,初步建立细胞工厂工艺,并与近年成品水痘疫苗检定指标相比较,评价工艺可行性和稳定性;方法将适宜代次的人胚肺二倍体细胞(2BS株)细胞按适当传代比例接种至四层细胞工厂(CF4),待细胞单层后,接种47代Oka株毒种;当病变达到5-10%时,用洗涤液洗涤细胞面;当病变达到70%以上时,用EDTA消化,收集病变细胞,-70℃保存;将病变细胞破碎、澄清后,分装冻干为成品;分别于原液和成品阶段取样进行相关检测,并将检测指标与近年成品指标进行比较;结果确定将36代细胞以1:2传代比例接种至CF4,3天后细胞可以稳定达到致密单层水平;感染复数(MOI)选择在0.01-0.001时,细胞病变可达到理想水平;洗涤液选择PBS,每层加入300-400ml,洗涤效果较好;EDTA消化液的浓度为0.05%,每层加入50ml,消化时间较为理想;收获时将病毒收获物在4℃条件下,1500rpm/15min回收效果理想;原液和成品疫苗检测结果均符合当前工艺要求;结论优化了细胞工厂工艺的关键参数;成功建立了水痘疫苗细胞工厂工艺;连续三批制备水痘疫苗,原液和成品均符合相关检测标准,初步证实了工艺的可行性和稳定性。
【关键词】：水痘-带状疱疹病毒 水痘减毒活疫苗 细胞工厂 工艺研究
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392-33
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-9
• 前言9-15
• 1 病毒简介9-10
• 2 不同毒株疫苗的研制10-12
• 2.1 Oka株及疫苗研制10-11
• 2.2 VZV_(84-7)株11
• 2.3 KMcC株11-12
• 3 水痘减毒活疫苗生产工艺流程12
• 4 研究进展12-14
• 4.1 灭活疫苗12
• 4.2 多价疫苗12-13
• 4.3 亚单位疫苗13
• 4.4 以减毒VZV为载体的重组疫苗13-14
• 4.5 其他形式的疫苗14
• 5 本课题的意义14-15
• 第1章 材料与设备15-17
• 1 仪器与设备15
• 2 材料与试剂盒15-16
• 3 细胞株、毒株及实验动物16-17
• 第2章 方法17-23
• 1 细胞复苏17
• 2 细胞传代17
• 3 感染17
• 4 洗涤17
• 5 收获17-18
• 6 原液和成品检测18-23
• 6.1 原液检测18-19
• 6.2 成品检测19-23
• 第3章 结果23-36
• 1 细胞工厂工艺制备水痘疫苗基本流程23
• 1.1 细胞传代流程23
• 1.2 疫苗制备流程23
• 1.3 冻干流程23
• 2 细胞工厂工艺制备水痘疫苗关键参数23-28
• 2.1 传代比例23-24
• 2.2 感染复数（MOI）24
• 2.3 洗涤液的选择与用量24-26
• 2.4 EDTA浓度26-27
• 2.5 离心条件27-28
• 2.6 单次收获物保存期限28
• 3 细胞工厂工艺连续三批制备水痘疫苗原液的检定结果28-29
• 3.1 连续三批水痘疫苗原液的检定结果28-29
• 3.2 生产终末代水痘病毒基因测序结果29
• 4 细胞工厂工艺连续三批制备水痘疫苗成品检定结果29-32
• 4.1 成品疫苗的检测结果29-30
• 4.2 其他检测结果30-32
• 5 细胞工厂工艺连续三批水痘疫苗成品与近年均值比较结果32-36
• 5.1 成品滴度比较结果32
• 5.2 成品水分比较结果32-33
• 5.3 牛血清白蛋白残留量比较结果33
• 5.4 抗生素残留量比较结果33-34
• 5.5 无菌检查比较结果34
• 5.6 支原体检查比较结果34
• 5.7 鉴别试验比较结果34
• 5.8 异常毒性检查比较结果34-35
• 5.9 热稳定性比较结果35-36
• 第4章 结论36-37
• 1 优化了水痘疫苗细胞工厂生产工艺中的关键参数36
• 2 建立并完善了水痘疫苗的细胞工厂生产工艺36
• 3 应用细胞工厂工艺连续三批制备成品水痘疫苗指标合格36
• 4 细胞工厂工艺与现行工艺制备的水痘疫苗近年结果相近36-37
• 第5章 讨论37-40
• 1 关于水痘疫苗37-38
• 2 水痘疫苗生产38-39
• 3 下一步工作计划39-40
• 参考文献40-46
• 致谢46

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本文编号：423350