以水泡性口炎病毒VSV为载体的结核疫苗VSV-846的免疫作用及机制探讨

发布时间：2017-06-09 10:13

  本文关键词：以水泡性口炎病毒VSV为载体的结核疫苗VSV-846的免疫作用及机制探讨，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目前,结核病依然是世界范围内的严重疾病。我国的结核病疫情告急,根据2010年第五次全国结核病流行病学的调查结果显示,我国年发病人数约为130万,约占全球发病的14.3%。结核病疫情之所以未能获得有效的控制,其主要原因是预防性结核病疫苗的开发缓慢以及进展不足。世界上目前唯一可用的结核疫苗BCG,因其只能保护幼儿及婴儿,不能在成人身上起到良好的保护效果,急需对BCG进行改进或研制新的疫苗。考虑到结核疫苗的现状,新型疫苗应该具有能够在体内建立长效免疫应答的特点。水泡性口炎病毒(Vesicular Stomatitis Virus,VSV)因其本身具备的大量优点且在普通人群内存在抗VSV抗体少等特点,使其成为一个理想的病毒疫苗载体。本文通过分子生物学的方法将含有结核杆菌三抗原融合基因p846及单个抗原Rv3615c,Mtb10.4,Rv2660c克隆至VSV-XN2载体,通过VSV病毒包装系统,将其包装在VSV病毒中,同时我们也构建了三个单个抗原及融合抗原TFP846的原核表达载体,并体外纯化了相应蛋白。将成功构建的重组VSV病毒融合抗原疫苗和单抗原疫苗以滴鼻的方式对小鼠进行免疫,以BCG组作为对照组。整个检测过程在攻毒后持续24周,检测相应的细胞免疫应答,评估其在抗结核感染中的作用,并探讨该保护作用的机制机理。统计结果表明重组病毒VSV-846疫苗诱生的细胞和体液免疫应答、及保护作用和传统疫相对单个抗原疫苗有着极其显著的差异,在感染阶段的后期(24周)与BCG免疫组相比也具有差异性,并且可以检测到记忆性T细胞的产生。通过Brdu,LDH,细胞染色等一系列实验表明,三抗原融合疫苗,彼此相互促进,使得整个疫苗较单独抗原所制备的疫苗具有明显的优势,能够激发更强劲的T细胞应答。并且我们也探究了VSV-846是否能够作为一个BCG的booster来促进其保护效果,实验结果显示,在攻毒后的第24周,经过VSV-846加强免疫组的细菌载量明显低于BCG组(CFU减少了1.10 log10,P0.01),说明此方案是可行的。综上,我们构建的三抗原融合的病毒载体结核疫苗VSV-846免疫小鼠能引起强烈的体液和细胞免疫应答,且以细胞免疫应答为主,可促使效应型记忆性T细胞的产生,能长期有效的抗BCG的感染,且保护效果好于单个抗原疫苗,有望成为一种能有效控制结核病复发的新型疫苗。
【关键词】：重组水泡性口炎病毒 BCG 记忆性T细胞
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-11
• 第一部分 病毒疫苗VSV-846的构建和鉴定11-22
• 材料和方法11-16
• 实验材料11-12
• 实验方法12-16
• 结果16-21
• 讨论21-22
• 第二部分 病毒疫苗VSV-846的免疫效果及其机制探讨22-39
• 材料和方法23-26
• 实验材料23-24
• 实验方法24-26
• 结果26-34
• 讨论34-37
• 小结37-39
• 参考文献39-43
• 综述43-52
• 参考文献48-52
• 附录52-54
• 致谢54-55

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1 张明;以水泡性口炎病毒VSV为载体的结核疫苗VSV-846的免疫作用及机制探讨[D];苏州大学;2015年

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本文编号：435137