霍乱弧菌甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因mtlD的克隆表达

发布时间：2017-06-10 21:06

  本文关键词：霍乱弧菌甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因mtlD的克隆表达，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的克隆表达霍乱弧菌甘露醇特异性磷酸烯醇式丙酮酸依赖的磷酸转移酶系统操纵子中的甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因mtlD。方法以测序株N16961染色体为模板,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增mtlD基因,扩增产物经NdeⅠ和XhoⅠ酶切后克隆入表达载体pET-30a。0.1 mmol/L IPTG诱导表达,超声裂解上清经Ni柱亲和层析纯化,比色法测定酶活性。结果 mtlD基因成功克隆入表达载体pET-30a,在宿主菌BL21中诱导表达,利用Ni亲和层析柱获得较高纯度的羧基端带His标签的MtlD蛋白,并具有酶活性。结论表达纯化了有活性的霍乱弧菌甘露醇-1-磷酸脱氢酶,为进一步的功能研究打下了基础。
【作者单位】： 中国疾病预防控制中心传染病预防控制所;山东省疾病预防控制中心;北京友谊医院;
【关键词】： 霍乱弧菌 甘露醇--磷酸脱氢酶 mtlD
【基金】：国家自然科学基金(No.81171640)~~
【分类号】：R378.3
【正文快照】： 甘露醇(Mannitol)是自然界分布最广泛的六元糖醇,在藻类和许多高等植物中作为储备物质存在[1-2]。在一些真菌中,甘露醇在渗透压调节和抵抗胁迫应激中发挥重要作用,从而促进菌株毒力[3-5]。通过磷酸烯醇式丙酮酸依赖的磷酸转移酶系统(PEP-dependent phosphotransferase system,

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 王海燕;闫梅英;赵英伟;阚飙;;霍乱弧菌甘露醇PTS操纵子中mtlR为转录抑制基因[J];微生物学报;2007年03期

2 王海燕;郑霄;娄静;闫梅英;赵英伟;阚飙;;霍乱弧菌两类菌株甘露醇发酵过程中PTS操纵子转录水平差异分析[J];中国医学科学院学报;2009年01期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 张翠彩;逄波;蒋秀高;阚飙;;霍乱弧菌基因表达分析中内参基因的选择[J];中国人兽共患病学报;2014年05期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 张红芝;El Tor型霍乱弧菌中甘露醇和山梨醇代谢机制研究[D];中国疾病预防控制中心;2009年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 刘广文;闫梅英;梁未丽;高守一;阚飙;;荧光定量PCR检测细菌染色体上基因拷贝数[J];中华微生物学和免疫学杂志;2006年04期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李秀全;贾桂平;王凤来;高志敏;贾晋琴;代庆棠;郭日典;梁昌福;;天津地区抗霍乱弧菌单克隆抗体(McAb)细胞系的建立及其应用的研究[J];天津医药;1989年05期

2 张协和;赵艳燕;韩松;王兰田;刘瑞辉;孙孝武;;ELTor霍乱弧菌实验感染鸭鹅的初步报告[J];中国公共卫生学报;1993年02期

3 吴光先;;非霍乱弧菌在不同食品中的生存和生长[J];国外医学.卫生学分册;1981年03期

4 林台城;;分离霍乱弧菌的选择性培养基[J];国际检验医学杂志;1982年02期

5 金天如;;生化反应不典型的霍乱弧菌的鉴定和一个致病新菌种的命名[J];国际检验医学杂志;1983年01期

6 程志华;鲍行豪;;非O1群霍乱弧菌研究近展[J];预防医学情报杂志;1985年05期

7 周用直;张鹏云;夏胜利;张锦;吴振溢;陈天寿;姜方武;田万红;;河南省非0—1群霍乱弧菌血清分型的研究[J];河南预防医学杂志;1987年04期

8 庞登文,杨弟存,侯惠珍;新疆首次发现非0-1群霍乱弧菌[J];西北国防医学杂志;1989年02期

9 杨建农;;决定01群霍乱弧菌毒力株和变异株对家兔的免疫原性及保护机理的因素[J];国际生物制品学杂志;1989年02期

10 袁新华,张汉民;O139霍乱弧菌所致霍乱的研究[J];疾病监测;1997年08期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 陈守义;胡玉山;李孝权;邓志爱;庞杏林;;非可培养状态下霍乱弧菌01群稻叶型的蛋白质谱特征分析[A];2008年中国微生物学会学术年会论文摘要集[C];2008年

2 张培培;李俊;俞盈;胡伟昭;陈健舜;吴蓓蓓;;浙江省舟山地区水产品及其养殖环境中霍乱弧菌污染状况调查[A];中国畜牧兽医学会食品卫生学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2010年

3 曹桂华;董建;胥向前;陈万庚;杨书宏;;盐城市盐都区1964-2009年霍乱病原学特征分析[A];华东地区第十次流行病学学术会议暨华东地区流行病学学术会议20周年庆典论文汇编[C];2010年

4 杨彬;王国永;王梅;孙林;段玉芹;;山东省霍乱弧菌毒力基因分布初步检测[A];新世纪预防医学面临的挑战——中华预防医学会首届学术年会论文摘要集[C];2002年

5 刘秀峰;;应用PCR方法检测霍乱弧菌及霍乱弧菌的耐药性分析[A];第五次全国中青年检验医学学术会议论文汇编[C];2006年

6 李柏生;谭海玲;王多春;邓小玲;陈经雕;王晓梅;钟豪杰;柯碧霞;;霍乱病例与环境来源霍乱弧菌的耐药和分子分型研究[A];新发和再发传染病防治热点研讨会论文集[C];2010年

7 吴国辉;贾庆良;;霍乱弧菌流行株分子流行病学研究近况[A];重庆市预防医学会2004年学术交流会论文集[C];2004年

8 陈守义;胡玉山;李孝权;邓志爱;庞杏林;王明;;非可培养状态下霍乱弧菌o1群稻叶型的蛋白质谱特征分析[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2008年

9 金春光;石优章;徐景野;;利用脉冲场凝胶电泳技术对O139霍乱弧菌分型的研究[A];应对突发公共卫生事件论坛论文集[C];2005年

10 傅玲琳;励建荣;;双通道荧光PCR快速检测水产品中主要致病性弧菌的研究[A];中国食品科学技术学会第八届年会暨第六届东西方食品业高层论坛论文摘要集[C];2011年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 记者 王艳红;霍乱弧菌基因组测序完成[N];人民日报;2000年

2 王有国;狐假虎威的“假霍乱”[N];医药经济报;2003年

3 记者 叶明e

本文编号：439878