大鼠脊髓少突胶质前体细胞的培养与鉴定方法

发布时间：2017-06-24 03:04

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【摘要】：目的探讨大鼠脊髓少突胶质前体细胞(OPCs)的分离纯化及诱导分化方法。方法取出生后3 d内SD大鼠脊髓,采用0.125%胰蛋白酶消化获取原代混合胶质细胞,培养10 d左右在37℃恒温摇床采取180 r/min摇速振摇并差速贴壁40 min获得纯化的OPCs;取纯化后培养3 d的OPCs免疫荧光鉴定细胞纯度或诱导分化。结果采用胰蛋白酶消化法获取原代混合胶质细胞、振摇并差速贴壁法分离纯化能够得到纯度较高的OPCs,折光性强,呈双极或三极形态,免疫荧光染色显示95%细胞表达A2B5和NG2(OPCs标志物),经诱导分化后表达O4及MBP(少突胶质细胞标志物)。结论采用振摇差速贴壁法可从大鼠脊髓中分离纯化获得高纯度的OPCs,获得的OPCs体外生长稳定,经诱导可分化为成熟的少突胶质细胞。
【作者单位】： 华中科技大学同济医学院附属同济医院神经内科;
【关键词】： 少突胶质前体细胞 脊髓 细胞培养 免疫荧光
【基金】：国家自然科学基金项目(81000521,81030021)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 随着现代化进程,交通及建筑事业的迅速发展,脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的发病率急剧上升。SCI导致原发性机械损伤和损伤区缺血缺氧导致的继发性级联损伤[1,2],其中缺血缺氧使少突胶质细胞(oligodendrocytes,OLs)大量死亡,引发广泛的脱髓鞘病变,造成不可逆性的神经功能

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