KCNJ11基因E23K基因多态对细胞膜电流的影响

发布时间：2017-06-27 04:08

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【摘要】：目的:KCNJ11基因E23K多态与心血管疾病、糖尿病等相关联,本实验通过研究人KCNJ11基因外显子处E23K多态对细胞膜电流密度的影响,探讨其与相关疾病关联的机制。方法:普通PCR法扩增KCNJ11基因外显子,重叠延伸PCR法使多态位点G※A突变,基因重组法将KCNJ11基因外显子(分别含23E和23K等位基因)插入pcDNA3.1/CT-GFP真核表达载体,脂质体转染法分别将重组质粒pcDNA3.1-KCNJ11(E)和pcDNA3.1-KCNJ11(K)转入HEK293T细胞。采用全细胞膜片钳技术,检测转染不同质粒的细胞膜电流密度。结果:PCR扩增获得长度为1 173 bp的KCNJ11基因外显子,成功构建pcDNA3.1-KCNJ11(E)和pcDNA3.1-KCNJ11(K)重组表达载体。全细胞膜片钳检测结果显示,两组转染不同质粒的HEK293T细胞表面均检测到正电流和负电流,细胞表面翻转电压均为50mV。两组细胞相比,转染pcDNA3.1-KCNJ11(E)质粒的细胞表面电流明显高于转染pcDNA3.1-KCNJ11(K)质粒的细胞(P0.05,n=10)。结论:KCNJ11基因外显子E23K多态能导致细胞膜电流发生改变,为进一步研究多态位点与相关疾病的关联机制提供实验基础。
【作者单位】： 兰州城市学院;兰州大学第一医院;北京体育大学;
【关键词】： KCNJ 基因多态性 膜片钳 细胞膜电流
【基金】：国家自然科学基金资助项目(31071032)
【分类号】：R363.1
【正文快照】： KCNJ11基因编码内向整流型钾离子通道蛋白Kir6.2,主要存在于心肌、骨骼肌、胰腺β-细胞、脑神经元等处[1,2]。细胞内ATP/ADP的变化、4,5-二磷酸肌醇以及长链乙酰辅酶A均能激活该通道。在运动过程中,能合理调节心脏对外界应急反应的适应能力,被认为是心脏的能量感受器。KCNJ11

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本文编号：488510