尾静脉放血对CUMS模型大鼠行为学和海马NOS变化的影响

发布时间：2017-07-02 20:34

  本文关键词：尾静脉放血对CUMS模型大鼠行为学和海马NOS变化的影响

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【摘要】：研究目的：观察尾静脉放血对慢性不可预见性应激(chronic unpredicted mild stress,CUMS)结合孤养抑郁模型大鼠行为学的影响,及其可能的一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)机制,推广放血疗法的临床应用范围,为抑郁症患者提供新的治疗方法。研究方法：健康雄性SD大鼠,适应性饲养一周后,根据开野实验(open-field test,OFT)水平运动路程的结果选择得分相近的动物33只纳入实验。用标记法随机将大鼠分为正常组(n=10)和造模组(n=23),采用CUMS结合孤养21天建立抑郁模型大鼠,正常组不干预；将造模成功的20只按OFT水平运动路程分层随机分为模型组和放血组,放血组尾静脉放血(10滴,3次/周,共14天),不干预模型组。治疗结束后,以OFT结果评价各组大鼠的行为学,采用逆转录聚合酶链反应RT-PCR方法检测各组大鼠海马内皮源型一氧化氮合酶(endothelial NOS, eNOS) mRNA、诱导源型一氧化氮合酶(inducible NOS, iNOS) mRNA、神经源型一氧化氮合酶(neural NOS, nNOS) mRNA的表达结果,免疫组织化学方法(immunohistochemistry, IHC)和免疫印迹(Western Blot, WB)方法检测各合酶蛋白表达水平：IHC观察阳性沉积物的分布和所检查指标的表达面积及平均光密度,用WB观察各合酶电泳条带宽度,并对其灰度值进行分析。研究结果：1.造模后行为学检测：与正常组相比,造模组水平运动路程、垂直运动次数、向中心探索次数和理毛次数显著减少(P0.01),大便粒数与正常组比差异无统计学意义(P0.05)。提示CUMS结合孤养可以成功复制抑郁模型大鼠。2.治疗后行为学检测：与正常组比较,模型组水平运动路程、垂直运动次数、向中心探索次数和理毛次数均减少(P0.01),放血组理毛次数下降(P0.05)；与模型组比较,放血组的水平运动距离、垂直运动次数及向中心探索次数均升高(P0.05)；各组间大便粒数差异无统计学意义(P0.05)。提示放血疗法可以改善CUMS模型大鼠的行为学。3.各组大鼠海马NOS表达测定：1) eNOS RT-PCR检测：模型组大鼠海马eNOS mRNA较正常组下降,放血使之升高；IHC检测：与正常组eNOS的表达面积和平均光密度相比,模型组和放血组大鼠海马eNOS明显降低(P0.01),且与模型组相比,放血组大鼠有所回升,差异有统计学意义(P0.001)；WB检测：与正常组相比,模型组和放血组大鼠海马eNOS/GAPDH的灰度值均下降(P0.05),但放血组eNOS/GAPDH阳性表达值降低幅度较模型组小,两组比较差异有统计学意义(P0.01)。提示尾静脉放血可以使CUMS模型大鼠海马eNOS阳性表达升高,但升高后水平仍不及正常组。2) iNOS RT-PCR检测：模型组大鼠海马iNOS mRNA较正常组升高,放血使之降低；IHC检测：与正常组iNOS的表达面积和平均光密度相比,模型组大鼠海马iNOS表达升高(P0.001),放血组亦升高(P0.05),但升高幅度不及模型组(P0.001)；WB检测：模型组的iNOS/GAPDH阳性表达值显著高于正常组(P0.01),放血组一定程度上降低了抑郁模型大鼠海马iNOS的含量,与模型组比较,差异有统计学意义(P0.01),放血组降低后的iNOS蛋白表达较正常组增加(P0.05)。提示尾静脉放血可以降低CUMS模型大鼠海马iNOS表达,但降低后的iNOS水平仍较正常组高。3) nNOS RT-PCR检测：结果与eNOS mRNA表达相一致；IHC检测：模型组和放血组大鼠nNOS的表达面积和平均光密度较正常组减少(P0.001),模型组和放血组间差异无统计学意义(P0.05)；WB检测：与正常组比较,抑郁模型大鼠海马nNOS/GAPDH阳性表达值下降(P0.001),而放血组的灰度值较模型组升高,差异有统计学意义(P0.01),正常组与放血组差异无统计学意义(P0.05)。提示尾静脉放血可以升高CUMS模型大鼠海马nNOS的阳性表达。结论：1. CUMS结合孤养可以成功建立抑郁动物模型,减少大鼠水平运动距离、垂直运动次数及向中心探索次数,尾静脉放血有效改善CUMS模型大鼠的行为学,增加该大鼠模型在开野实验中的运动和探索能力。2. CUMS结合孤养致大鼠抑郁样行为改变与海马内NOS水平相关：CUMS模型大鼠海马内eNOS、nNOS的表达下降,iNOS表达上升,尾静脉放血可能通过升高eNOS、nNOS的含量,降低iNOS的水平,从而发挥抗抑郁作用。
【关键词】：尾静脉放血 抑郁症 eNOS iNOS nNOS
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R245;R-332
【目录】：

• 中文摘要7-9
• Abstract9-12
• 前言12-13
• 第一部分 理论研究13-20
• 1. “气机郁滞”是抑郁症发生的核心病机13-14
• 1.1 从“气机”探讨抑郁症成因13
• 1.2 从“情志”探讨抑郁症发生13
• 1.3 脏腑功能与抑郁症的相关性13-14
• 2. 气体信号分子与抑郁症之间的相关性研究14-15
• 2.1 一氧化氮(NO)与抑郁症14
• 2.2 一氧化碳(CO)与抑郁症14
• 2.3 硫化氢(H2S)与抑郁症14-15
• 3. 中医学“气”、“血”与气体信号分子的关系探讨15
• 3.1 “气”与气体信号分子15
• 3.2 “气”与“血”15
• 3.3 气体信号分子与“血”15
• 4. 放血疗法在情志病中的应用研究15-16
• 5. 放血疗法的中医治疗原则与现代医学作用机制16-20
• 5.1 放血疗法的中医治疗原则16-17
• 5.2 放血疗法的现代医学研究作用机理17-20
• 第二部分 实验研究20-33
• 1. 实验材料与仪器20
• 1.1 实验动物20
• 1.2 主要仪器与设备20
• 1.3 主要试剂与耗材20
• 2. 实验方法20-27
• 2.1 分组与CUMS结合孤养抑郁模型的建立20-22
• 2.2 治疗方法22
• 2.3 Open-field test行为学检测22
• 2.4 取材22
• 2.5 观察指标及检测方法22-26
• 2.6 统计学处理和分析26-27
• 3. 实验结果27-33
• 3.1 造模结束开野实验结果27
• 3.2 治疗后开野实验结果27-28
• 3.3 NOS表达测定28-33
• 第三部分 讨论33-38
• 1. 应激致抑郁样行为改变33
• 2. 放血改善CUMS模型大鼠行为学33-34
• 3. CUMS结合孤养致大鼠抑郁样行为学改变与NOS变化的相关性34-36
• 3.1 应激致抑郁样行为改变与eNOS34-35
• 3.2 应激致抑郁样行为改变与iNOS35
• 3.3 应激致抑郁样行为改变与nNOS35-36
• 4. 放血通过调节海马内NOS水平改善大鼠抑郁样行为36
• 5. 结论36
• 6. 不足和展望36-38
• 参考文献38-45
• 攻读硕士期间取得的学术成果45-46
• 致谢46

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