松果菊苷对MPTP亚急性帕金森病小鼠模型炎性损伤保护机制的研究

发布时间：2017-07-05 00:14

  本文关键词：松果菊苷对MPTP亚急性帕金森病小鼠模型炎性损伤保护机制的研究

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【摘要】：目的：应用MPTP亚急性帕金森病小鼠模型,观察松果菊苷对该模型中小鼠的DA能神经元损伤的保护作用。研究、探讨松果菊苷对该模型所致炎性反应的作用机制,并阐明松果菊苷发挥DA能神经元保护作用可能的分子信号通路,为探索中医药治疗PD的理论和实践提供有益的思路和方法。方法：选用10周龄健康野生型,C57BL/6J雄性小鼠,给予松果菊苷(ECH 30 mg·kg-1,每天一次,实验的第1d至最后1d,持续16d)或等量的生理盐水灌胃,1h后予MPTP (MPTP 30 mg-kg-1,每天一次,实验的第8d至第12d,持续5d)或等量的生理盐水皮下注射,建且MPTP亚急性帕金森病小鼠模型。应用自发活动、爬杆实验以及步态实验这三项行为学指标观察多巴胺(Dopamine, DA)运动能神经元的损伤。应用酪氨酸羟化酶(tyro sine hydroxylase, TH)免疫组织化学染色结合体视学计数分析黑质致密部(substantia nigra pars compacta, SNpc)和中脑腹侧被盖区(ventral tegmental area, VTA) DA能神经元的损伤,并通过胶质细胞原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)染色检测SNpc区和VTA区星形胶质细胞的活化。酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中的炎性因子——肿瘤坏死因子α (Tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白介素-1β(Interleukin-1 beta, IL-1β)、干扰素-γ (Interferon-gama, IFN-y)的变化。蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测黑质(substantia nigra, SN)区小胶质细胞激活的标志物——离子钙接头蛋白分子1 (Ionized calcium-binding adaptor, IB A 1),胶质细胞激活相关的凋亡因子caspase-3的蛋白表达水平,抗凋亡因子ERK1/2 (extracellular signal-regulated kinase 1/2)及ERK1/2磷酸化(phosphorylated signal-regulated kinase 1/2, p-ERK)水平,自噬溶酶体调节位点AKT(protein kinase B)、AKT磷酸化(phosphorylated protein kinase B, p-AKT)水平以及mTOR的磷酸化(phosphorylated mammalian target of rapamycin, p-mTOR)水平,脑源性神经营养因子(Brain derived neurotrophic factor, BDNF)、BDNF前体蛋白(pro-BDNF)、胶质细胞源性神经营养因子(Glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF)以及TNF-α的蛋白水平的表达。结果：松果菊苷能够增加MPTP亚急性损伤小鼠的白发活动的总路程(P0.05),缩短爬杆总时间(P0.05),但步态分析的变化无统计学差异(P0.05)。松果菊苷显著降低MPTP所致TH+神经元数目的减少(P0.05),减少反应性星形细胞的标记物GFAP的产生(P0.05)。松果菊苷抑制中脑黑质区IBA1 (P0.05)、凋亡蛋白caspase-3 (P0.05)及促炎因子TNF-α (P0.05)的表达。松果菊苷减少血清中TNF-α (P0.05)、IFN-γ (P0.05)和IL-1β (P0.05)的产生。松果菊苷下调pro-BDNF (P0.05)的表达,并上调神经营养因子BDNF (P0.05)、GDNF (P0.05)以及抗凋亡因子p-ERK1/2/ERK1/2 (P0.05)的表达。松果菊苷表现出上调p-AKT/AKT (P0.05)、下调p-mTOR (P0.05)蛋白表达的趋势。结论：1.松果菊苷具有改善MPTP亚急性损伤小鼠的行为学表现的作用。2.松果菊苷能够对MPTP亚急性损伤小鼠的DA能神经元发挥抗炎、抗凋亡的保护作用。3.松果菊苷通过调节小胶质细胞与星形胶质细胞的功能,抑制了炎性反应,增强了DA能神经元的营养支持。
【关键词】：帕金森病 MPTP 炎性反应 胶质细胞 松果菊苷 pro-BDNF ERK1/2
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R285.5;R-332
【目录】：

• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 绪论(前言)11-12
• 第一部分 理论研究12-15
• 一、帕金森病炎性反应的细胞和分子学基础12-13
• 1 PD炎性反应与胶质细胞的活化12
• 2 PD炎性反应与ERK1/2/MAPK、PI3K/Akt/mTOR信号通路的相关研究12-13
• 二、中医药治疗PD的现状13
• 三、松果菊苷治疗PD的理论基础及研究进展13-15
• 第二部分 实验研究15-29
• 1 实验目的15
• 2 材料与方法15-19
• 2.1 实验动物15
• 2.2 主要试剂与仪器15-16
• 2.3 实验动物分组16
• 2.4 实验流程16
• 2.5 实验方法16-19
• 2.6 统计分析19
• 3 实验结果19-28
• 3.1 行为学观察结果19-20
• 3.2 给药后小鼠中脑DA能神经元损伤评价20-21
• 3.3 DA神经元的凋亡21-22
• 3.4 小胶质细胞的活化22
• 3.5 SN区炎性因子TNF-α的表达水平及血清中TNF-α、IFN-7及IL-1β的含量22-23
• 3.6 反应性星形胶质细胞的形态及数量23-24
• 3.7 SN区神经营养因子BDNF、GDNF及pro-BDNF的表达24-26
• 3.8 SN区p-ERK1/2/ERK1/2的表达26-27
• 3.9 SN区p-Akt/Akt以及p-mTOR的表达27-28
• 4 结论28-29
• 讨论29-32
• 附录32-41
• 综述32-38
• 英文缩略词表38-39
• 主要溶液配制39-41
• 参考文献41-48
• 攻读硕士学位期间取得的学术成果48-49
• 致谢49

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本文编号：519855