SDF-1α-GFP基因重组腺病毒载体的构建及其转染大鼠心肌细胞的条件优化研究

发布时间：2017-07-17 09:26

  本文关键词：SDF-1α-GFP基因重组腺病毒载体的构建及其转染大鼠心肌细胞的条件优化研究

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【摘要】：目的:构建基质细胞衍生因子1α-绿色荧光蛋白(SDF-1α-GFP)重组腺病毒载体并摸索其转染大鼠心肌细胞系的最佳条件。方法:人工合成SDF-1α基因并插入线性化表达载体,转化感受态E.coliDH5a细胞。筛选阳性菌落,采用DNA测序技术测定目的基因序列。用获得的重组腺病毒(adenovirus,Ad)载体转染293T细胞,采用qPCR技术测定SDF-1α的mRNA表达水平。用不同滴度感染复数Ad-SDF-1α-GFP转染H9C2心肌细胞系,采用倒置相差显微镜及荧光显微镜分别在24和48h检测细胞形态及GFP蛋白阳性的细胞比率。结果:DNA测序证实SDF-1α基因构建成功。qPCR结果显示,与阴性对照组相比,MOI 2000组的SDF-1α的表达水平增加了约10 000倍,MOI 8000组的SDF-1α表达水平增加了约210 000倍。转染H9C2心肌细胞系的结果显示,MOI值为2 000、3 000、4 000、5 000、6 000、7 000及8 000的SDF-1α-GFP转染H9C2细胞48h后,其转染率分别为(45±5.04)%、(75±5.70)%、(80±5.67)%、(85±6.45)%、(90%±6.90)%、(90±5.22)%和(95±5.36)%,但是当MOI值区间为5 000~8 000时,细胞形态上出现明显损伤。结论:MOI值为4 000的Ad-SDF-1α-GFP转染H9C2细胞系48h能达到最佳的转染效率,并最小程度损伤细胞。
【作者单位】： 暨南大学附属第一医院心内科;
【关键词】： 基质细胞衍生因子α基因 重组腺病毒 载体构建 HC细胞
【基金】：国家自然科学基金青年项目资助(No:81100078) 教育部科学研究重点项目资助(NO:211207) 广州珠江科技新星资助计划项目(No:2012J2200063) 广东省科技厅博士启动项目资助(No:S2011040001392)
【分类号】：R363
【正文快照】： 由于心肌细胞在缺血坏死后自身难以修复,干细胞治疗已经成为治疗心血管疾病新的研究方向。研究表明,干细胞植入后不能顺利到达心脏损伤区域而影响其治疗效果。目前证实SDF-1α/CXCR4信号通路是增加干细胞“归巢”于损伤心肌的关键。如果在目标区域内高表达基质细胞衍生因子(st

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本文编号：552969