不同片段HIV-1膜蛋白三聚体的构建、表达及其免疫原性

发布时间：2017-07-30 02:11

  本文关键词：不同片段HIV-1膜蛋白三聚体的构建、表达及其免疫原性

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【摘要】：目的构建、表达不同片段1型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)的膜蛋白三聚体,并检测其免疫原性。方法以中国主要流行株HIV-1CRF_07 BC亚型基因为模板构建pFUSE-gp160重组质粒,以pFUSE-gp160为模板构建pFUSE-gp140FF、pFUSE-gp120FF、pFUSE-gp41FF、pFUSE-N55FF、pFUSE-N28FF重组质粒,将重组质粒分别转染293F细胞,转染120 h后,收获上清,经Ni-NTA superflow、nProtein A SepharoseTM4 Fast Flow及Superose 12 Prep Grade分子筛纯化后,分别进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。将各重组蛋白联合MF59佐剂经大腿肌肉注射免疫豚鼠,100μg/只,分别于第1、30及60天各免疫1次,初次免疫前7 d及末次免疫后第90天心脏采血,分离血清,ELISA法及假病毒系统分别检测血清特异性抗体效价及中和抗体滴度。结果质粒pFUSE-gp160、pFUSE-gp140FF、pFUSE-gp120FF、pFUSE-gp41FF、pFUSE-N55FF、pFUSE-N28FF经测序鉴定构建正确。各纯化蛋白的SDS-PAGE及Western blot鉴定均可见目的条带,gp120FF和gp140FF均可高通量表达,其表达量分别为6和2.5 mg/L,gp41FF、N55FF和N28FF蛋白的表达量均低于0.5 mg/L,纯化后的纯度均较高。gp140FF组和gp120FF组豚鼠血清抗体效价分别为3.2×105和5.33×105、中和抗体滴度分别为405和462,均显著高于其他组(P0.05)。结论 gp140FF和gp120FF能诱导豚鼠产生较强的体液免疫反应和中和抗体,本实验为HIV-1疫苗的研发提供了参考。
【作者单位】： 中国疾病预防控制中心性病艾滋病预防控制中心;
【关键词】： 型人类免疫缺陷病毒 膜蛋白 三聚体 免疫原性
【基金】：国家十二五科技重大专项-艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治-DNA疫苗(2012ZX10001008-012) 传染病预防控制国家重点实验室留学归国人员项目资助(2012SKLID402)
【分类号】：R392.1
【正文快照】： 1型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiencyvirus type 1,HIV-1)是艾滋病(acquired immune de-ficiency syndrome,AIDS)的主要病原体,控制该病毒的传播与发展已成为全球性难题。目前,对HIV-1的研究已有较大进展,其传播方式和发病机理的研究进展使预防HIV-1感染有了更多的选

【参考文献】

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本文编号：592062