帕金森氏病模型构建方法的探讨

发布时间：2017-08-02 16:12

  本文关键词：帕金森氏病模型构建方法的探讨

  更多相关文章： 帕金森氏病 转基因PD果蝇模型 转基因PD小鼠模型

【摘要】：研究目的:为了更好地了解PD的病因、发病机制、发生发展过程中的分子机制及潜在的治疗靶点,本实验分别构建了模拟突变型LRRK2遗传因素、突变型VPS35-α-synuclein遗传因素相互作用及突变型VPS35-LRRK2遗传因素相互作用导致的PD果蝇模型,并进行了用于构建PD小鼠模型的相关病毒载体的筛选,以便构建模拟PD相关遗传因素导致的PD小鼠模型,进行后续研究。方法:1.利用Elav-GAL4,Ddc-GAL4,Chat-GAL4,24B-GAL4果蝇品系,将UAS-LRRK2-WT,UAS-LRRK2-G2019S和UAS-LRRK2-R1441C表达在所有神经元,多巴胺能神经元,胆碱能神经元和肌肉组织中,构建模拟突变型LRRK2遗传因素导致的PD果蝇模型。2.将VPS35基因构建到pUAST表达载体中,利用显微注射技术将构建好的重组分子注射入w1118果蝇卵,并利用mini-white标记基因筛选,得到UAS-VPS35-WT,UAS-VPS35-D260N转基因果蝇品系。3.利用Elav-GAL4,Ddc-GAL4果蝇品系,将UAS-VPS35-WT,UAS-VPS35-D260N,UAS-VPS35-RNAi表达在所有神经元和多巴胺能神经元中,将所获得的Elav-GAL4;UAS-VPS35-WT(D260N/RNAi),Ddc-GAL4;UAS-VPS35-WT(D260N/RNAi)果蝇品系分别与UAS-α-synuclein-A53T,UAS-LRRK2-G2019S果蝇品系杂交,构建模拟突变型VPS35-α-synuclein遗传因素相互作用及突变型VPS35-LRRK2遗传因素相互作用导致的PD果蝇模型。4.观察果蝇的生命周期和运动能力的变化情况,应用免疫荧光化学法和Western blot检测TH的表达变化。5.通过脑立体定位技术,向C57B小鼠分别注射6种病毒载体,以用于构建PD小鼠模型的相关病毒载体的筛选。结果:1.Elav-GAL4;UAS-LRRK2-G2019S,Elav-GAL4;UAS-LRRK2-R1441C,Ddc-GAL4;UAS-LRRK2-G2019S,Ddc-GAL4;UAS-LRRK2-R1441C突变果蝇品系均出现生命周期缩短、运动能力(攀爬能力)减弱和多巴胺能神经元的丢失。Ddc-GAL4;UAS-LRRK2-G2019S果蝇品系较之更为突出的表现出这些症状。2.VPS35(D260N/RNAi)-α-synuclein(A53T),VPS35(D260N/RNAi)-LRRK2(G2019S)突变果蝇品系均出现生命周期缩短、运动能力(攀爬能力)减弱和多巴胺能神经元的丢失。3.rAAV1-EGFP病毒载体在术后3 w C57B小鼠的纹状体中表达少,黑质中无表达,术后4 w和5 w C57B小鼠的纹状体和黑质中均有表达;HSV1/NX01-GFP病毒载体在术后3 w、4 w和5 w C57B小鼠的纹状体和黑质中均有表达;HSV1/NX03-GFP病毒载体在术后3 w C57B小鼠的纹状体和黑质中无表达,在术后4 w和5 w C57B小鼠的纹状体和黑质中表达少且零星分布。结论:1.Ddc-GAL4;UAS-LRRK2-G2019S突变果蝇品系可以作为转基因PD果蝇模型用于后续的研究。2.VPS35(D260N/RNAi)-α-synuclein(A53T),VPS35(D260N/RNAi)-LRRK2(G2019S)突变果蝇品系可以作为转基因PD果蝇模型用于后续的研究。3.HSV1/NX01-GFP病毒载体可以用于构建转基因PD小鼠模型,用于后续的研究。
【关键词】：帕金森氏病 转基因PD果蝇模型 转基因PD小鼠模型
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R742.5;R-332
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-13
• 第一部分LRRK2转基因PD果蝇模型的建立13-34
• 材料与方法13-19
• 1. 材料13-14
• 2. 方法14-19
• 结果19-31
• 讨论31-33
• 结论33-34
• 第二部分VPS35-α-synuclein, VPS35-LRRK2转基因PD果蝇模型的建立34-81
• 第一节UAS-VPS35-WT, UAS-VPS35-D260N转基因果蝇品系的构建34-38
• 材料与方法34-38
• 第二节VPS35-α-synuclein, VPS35-LRRK2转基因PD果蝇模型的建立38-51
• 材料与方法38-51
• 结果51-77
• 讨论77-80
• 结论80-81
• 第三部分 构建PD小鼠模型的相关病毒载体的筛选81-96
• 材料与方法81-85
• 1. 材料81-82
• 2. 方法82-85
• 结果85-93
• 讨论93-96
• 结论96
• 参考文献96-101
• 综述 PD果蝇模型的研究现状及进展101-110
• 参考文献107-110
• 缩略词表（ABBREVIATION）110-111
• 攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文111-112
• 致谢112-113

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 周明付，张华，吴金良，郭漳生，林玲，汤善钧，，周祥庭;大鼠帕金森氏病模型的建立[J];河南医科大学学报;1994年04期

2 康复安,王忠诚,孙志强,刘玉芝,裴进京,何乐,王金明,罗世祺,郝建忠,王集生,甲戈,裴更,虞文焕,王稚辉;同种胚胎中脑腹侧部植入猴帕金森氏病模型的实验研究[J];中华神经外科杂志;1991年03期

3 孙晋浩,杨琳,高英茂,李振华;6-羟基多巴不同部位毁损大鼠帕金森氏病模型的建立及比较[J];现代康复;2001年23期

4 费力,江澄川,冯林音,季耀东;内侧前脑束毁损制作大鼠帕金森氏病模型[J];中华实验外科杂志;2005年01期

5 陈继贵;;脑移植免疫[J];日本医学介绍;1992年03期

6 李鸿钧,苏婷,马雁冰,和占龙,鲁帅尧,戴长柏,孙茂盛;毕赤酵母表达的neurturin对恒河猴帕金森氏病模型中黑质多巴胺能神经元的保护作用[J];生物化学与生物物理进展;2004年08期

7 章为;TH和AADC基因在帕金森氏病模型大鼠纹状体内的共表达[J];四川解剖学杂志;2001年01期

8 陈学东,蒋立新,周长满,刘大庸,钟世镇;黑质与纹状体毁损所致大鼠帕金森氏病模型的行为学比较[J];神经解剖学杂志;1999年03期

9 马骏,田青,陈雄华,陈泽斌,王彦青,刘又香,孙国杰;针刺对帕金森氏病模型大鼠脑皮质NOS含量的影响[J];湖北中医学院学报;2000年02期

10 ;[J];;年期

中国博士学位论文全文数据库 前3条

1 王文举;Neurturin和TH双顺反子重组腺病毒的构建及对恒河猴帕金森氏病模型的组合基因治疗评价[D];北京协和医学院;2011年

2 孔祥臣;新型化合物FLZ对热休克蛋白的诱导作用和对实验性帕金森氏病模型多巴胺系统保护作用及机制的研究[D];北京协和医学院;2011年

3 严敏;Lmx1α和NTN定向诱导人脐带间充质干细胞为DA能神经元及靶向性治疗恒河猴PD模型的研究[D];北京协和医学院;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 刘晴晴;帕金森氏病模型构建方法的探讨[D];苏州大学;2016年

本文编号：610107