牛血清中牛病毒直接免疫荧光检测方法的建立及验证

发布时间：2017-08-02 19:34

  本文关键词：牛血清中牛病毒直接免疫荧光检测方法的建立及验证

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【摘要】：目的建立牛血清中牛病毒直接免疫荧光检测方法,并进行验证。方法建立直接免疫荧光法检测牛血清中牛病毒,对细胞接种浓度和血清浓度、病毒接种量、荧光抗体浓度、染色温度及时间进行优化;对优化的方法进行重复性、特异性、灵敏度验证,并与细胞培养法的检测结果进行比较。结果优化的试验条件为:Vero和BT细胞的接种浓度分别为0.5×105和1.0×105个/ml,血清浓度为5%,病毒接种量为100~300 CCID50,荧光抗体1∶10稀释,4℃染色12 h以上,但不超过24 h。2名实验人员按建立的方对3批牛血清分别进行3次检测,均未检出6种牛病毒;每种病毒仅在相应抗体进行染色时出现荧光;该方法检测6种牛病毒的灵敏度较高。分别采用细胞培养法和直接免疫荧光法检测15批新生牛血清和5批胎牛血清,结果均未检出牛病毒。结论建立的牛血清中牛病毒直接免疫荧光检测方法重复性好,特异性强,灵敏度高,操作简便,与细胞培养法的检测结果无差异,可应用于牛血清中牛病毒的检测。
【作者单位】： 四川大学生物治疗国家重点实验室;成都生物制品研究所有限责任公司;
【关键词】： 牛血清 牛病毒 直接免疫荧光法
【分类号】：R392-33
【正文快照】： 生物制品,尤其是病毒性疫苗大多都是通过细胞培养制备。虽然近年来无血清培养基正在扩大使用,并证明是可行的,但需要复杂的设备,且仅限于特殊的细胞类型[1],因此,仍需采用添加牛血清的培养基生产生物制品[2]。在培养系统中加入适量血清可补充细胞生长所需的生长因子、激素、贴

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 宋立荣;李思经;;谈新生牛血清的质量控制[J];黑龙江畜牧兽医;2008年10期

2 张维;骞爱荣;高翔;胡丽芳;瓮媛媛;韩晶;商澎;;细胞骨架染色中不同固定方法的探讨[J];中国细胞生物学学报;2010年01期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 杨琴;朱秋劲;;乳公犊资源的开发与利用[J];贵州农业科学;2009年11期

2 谭娟;姚蓉;李路;梁超;李方艳;胡平雄;;洋葱鳞茎内表皮细胞骨架显微镜观察实验方法的改进[J];怀化学院学报;2011年05期

3 王宏刚;陈成彬;王春国;陈力;宋文芹;白艳玲;张金红;刘方;;细胞骨架观察实验的改进[J];实验技术与管理;2014年09期

4 王哲;郝锋涛;陈晓虎;杨周岐;丁冲;商澎;;原子力显微镜压痕曲线分析方法的比较研究[J];生物医学工程学杂志;2014年05期

5 王哲;郝峰涛;杨周岐;陈晓虎;商澎;;原子力显微镜技术检测几种骨组织细胞力学性能[J];中国细胞生物学学报;2014年05期

6 袁良玉;黄敏;户美玲;吕冰凌;潘海龙;孟丽;;不同细胞进行牛血清中牛源病毒检测的比较试验[J];中国兽药杂志;2014年12期

中国硕士学位论文全文数据库 前1条

1 马岩松;新生牛血清病毒检测[D];吉林农业大学;2011年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前6条

1 钱鑫萍;杨雪飞;吕顺;周导南;范远景;;细胞骨架的显微镜观察实验方法改进研究[J];安徽农业科学;2008年22期

2 王义权,周开亚,徐珞珊,徐国钧;不同固定剂保存动物组织标本对RAPD反应的影响[J];动物学杂志;1999年01期

3 高美钦,黄雄飞,肖志芸,杨代兴;不同固定液对冷冻切片HE染色影响的比较[J];福建医科大学学报;2001年04期

4 姚宇华,熊江辉,梁仲刚,严洪,李莹辉;心肌细胞微管图像的灰度特征分析(英文)[J];航天医学与医学工程;2004年05期

5 陈晓军;何泽涌;;不同固定液、染色法显示结缔组织肥大细胞效果的比较[J];解剖学通报;1990年04期

6 姚宇华,严洪,熊江辉;基于分形特征的模拟失重条件下细胞骨架的图像分析[J];中国图象图形学报;2004年02期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 孔梅;邢长永;王莺;;直接免疫荧光法与多重逆转录聚合酶链反应对呼吸道感染常见病毒的诊断价值[J];中华医院感染学杂志;2012年23期

2 谢敬,周富道,洪华;直接免疫荧光法检测泌尿生殖道衣原体[J];重庆医学;1994年02期

3 王登科;单克隆抗体直接免疫荧光法快速诊断水痘-带状疱疹病毒感染[J];国外医学.预防.诊断.治疗用生物制品分册;1990年06期

4 谈小荣;褚晓明;张建斌;;直接免疫荧光法检测狂犬病毒滴度的可行性研究[J];微生物学免疫学进展;2011年02期

5 何霞辉;;直接免疫荧光法病毒抗原测定在呼吸道感染性疾病中的诊断应用[J];中国实用医药;2014年19期

6 林麟;;直接免疫荧光法诊断大疱性类天疱疮:皮损范围和部位的影响[J];国外医学.皮肤病学分册;1989年06期

7 ;应用细胞离心增敏的直接免疫荧光法检测临床标本中的单纯疱疹病霉[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;1997年06期

8 王宏伟,王家璧,刘跃华,王晓峰,郑占才;聚合酶链反应和直接免疫荧光法检测沙眼衣原体感染的方法比较[J];中华皮肤科杂志;1997年03期

9 俞小卫;王亚楠;程宝金;马玲娣;;直接免疫荧光法病毒抗原测定在呼吸道感染性疾病诊断中的应用[J];检验医学;2013年01期

10 林志雄,黄引贤,李树根,李力复,童昆周;应用直接免疫荧光法检测猪流行性腹泻病毒的研究[J];中国进出境动植检;1997年02期

中国重要会议论文全文数据库 前1条

1 邱红;江淑芳;李中浪;;直接免疫荧光法对多种呼吸道病毒的检测的临床意义[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年

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本文编号：610907