人血清白蛋白特异性单域抗体的筛选鉴定、特性分析及应用

发布时间：2017-08-03 12:15

  本文关键词：人血清白蛋白特异性单域抗体的筛选鉴定、特性分析及应用

  更多相关文章： 人血清白蛋白 噬菌体展示技术 单域抗体 白蛋白检测 亲和去除法

【摘要】：人血清白蛋白是存在于人体内的一种重要而常见的蛋白质,是疾病检测与诊断的重要标记物之一。同时,关于如何去除血清中高丰度白蛋白以促进血浆蛋白质组学分析和生物标记物的发现,一直以来也备受人们的关注。因此,建立并发展一种有效而快速的白蛋白检测方法,具有重要意义。同时,关于如何建立有效去除血清高丰度蛋白质(白蛋白)的方法的问题也亟待解决,其对血清蛋白质组学的深入研究至关重要。本研究旨在对骆驼免疫人血清白蛋白、建立免疫文库的基础上,借助课题组成熟的噬菌体展示平台与技术,筛选并经PE-ELISA鉴定、测序、表达获得人血清白蛋白特异的单域抗体；再对这些单域抗体进行一系列特性分析并试图建立一套白蛋白检测的方法,同时试图利用NHS-活化珠子与单域抗体结合组装亲和柱、建立一套亲和去除的方法。经过努力,最终我们成功获得了一个高质量的噬菌体展示白蛋白单域抗体文库,并获得了四株特异针对人血清白蛋白的单域抗体。经过一系列分析,这些单域抗体表现出纯度好、产量高、特异性强、亲和力高等良好的特性。对于白蛋白的检测,我们成功建立了基于链霉亲和素-生物素固相反应系统的定向双单域抗体夹心检测的方法,线性范围10-1000 ng/mL、最低检测限达到21.2 ng/mL,为建立科学完善的白蛋白检测方法提供基础。最后,我们成功建立了一套基于单域抗体的亲和去除法,并成功地去除了血清中的高丰度蛋白(血清白蛋白),为血清蛋白质组学以及血清中疾病标志物的发现提供实验基础。
【关键词】：人血清白蛋白 噬菌体展示技术 单域抗体 白蛋白检测 亲和去除法
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-10
• 绪言10-12
• 第一章 文献综述12-21
• 1.1 人血清白蛋白的研究进展12-17
• 1.2 驼源单域抗体的研究进展17-21
• 第二章 噬菌体展示人白蛋白单域抗体文库的构建21-36
• 前言21
• 2.1 实验材料和方法21-31
• 2.2 实验结果31-33
• 2.3 结果讨论33-36
• 第三章 人白蛋白单域抗体的筛选、表达及鉴定36-52
• 前言36
• 3.1 实验材料和方法36-46
• 3.2 实验结果46-50
• 3.3 结果讨论50-52
• 第四章 定向双抗夹心检测方法的建立52-63
• 前言52
• 4.1 实验材料和方法52-59
• 4.2 实验结果59-61
• 4.3 结果讨论61-63
• 第五章 亲和去除法的建立63-72
• 前言63
• 5.1 实验材料和方法63-67
• 5.2 实验结果67-70
• 5.3 结果讨论70-72
• 第六章 结论72-74
• 6.1 结论72
• 6.2 展望72-74
• 致谢74-75
• 参考文献75-80
• 作者简介80-81

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本文编号：614331