肠出血性大肠杆菌O157∶H7毒力蛋白NleB1的表达、纯化及多克隆抗体的制备与鉴定

发布时间：2017-08-03 18:38

  本文关键词：肠出血性大肠杆菌O157∶H7毒力蛋白NleB1的表达、纯化及多克隆抗体的制备与鉴定

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【摘要】：目的构建肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7毒力蛋白nleB1基因的原核表达载体,诱导表达重组蛋白,制备NleB1的抗血清。方法从EHEC O157∶H7 EDL933株的全基因组中PCR扩增出编码nleB1的990个碱基序列,构建原核表达载体pET24a-nleB1,将构建的重组表达载体的质粒pET24a-nleB1转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,利用异丙硫半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白His-NleB1表达,并利用镍柱进行亲和层析纯化和切胶纯化,以纯化后的融合蛋白His-NleB1为抗原免疫BALB/c小鼠,获得抗血清。Western印迹和ELISA法鉴定获得的抗血清。结果成功构建了pET24a-nleB1原核表达载体,纯化得到融合蛋白His-NleB1,进而免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,Western印迹和ELISA法证实多克隆抗体制备成功。结论成功获得了EHEC O157∶H7的毒力蛋白NleB1的多克隆抗体,为研究EHEC O157∶H7毒力蛋白NleB1的功能奠定了基础。
【作者单位】： 军事医学科学院生物工程研究所;安徽大学;
【关键词】： 肠出血性大肠杆菌 NleB 原核表达 蛋白纯化 多克隆抗体
【分类号】：R378.21
【正文快照】： 肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic Esche-richia coli,EHEC)O157∶H7是一种危害严重的肠道致病菌,该菌可使人患腹泻、出血性结肠炎(hemor-rhagic colitis,HC)、溶血性尿毒综合征(hemolyticuremic syndrome,HUS)及血栓形成性血小板减少性紫癜(thrombotic thrombocytopenic p

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本文编号：615799