人脐带间充质干细胞原代培养方法的改良

发布时间：2017-08-03 20:20

  本文关键词：人脐带间充质干细胞原代培养方法的改良

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【摘要】：目的:探讨体外组织块培养原代人脐带间充质干细胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)的改良方法,并观察其形态,免疫表型,成脂成骨分化等生物学特性。方法:从健康足月儿获得脐带,将血管剥离后,余下的结缔组织剪成小块,分别用传统植块法和改良植块法分离培养原代hUC-MSCs。MTT法检测细胞增殖情况并绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞免疫表型,成脂成骨诱导分化检测其分化潜能,化学染色鉴定诱导分化结果。结果:改良植块法脐带组织贴壁培养3~4 d即可从组织块边缘长出长梭形成纤维样原代细胞,5~6 d后细胞可长满80%,比传统植块法原代细胞培养周期缩短了一半以上时间,细胞传代后流水状或漩涡状生长,MTT法显示细胞增殖能力强,流式细胞仪检测提示CD90,CD105,CD73,CD166,CD29,CD44均阳性表达,阳性率均在95%以上,CD45和HLA-DR均阴性表达,阳性率低于2%;诱导分化实验及化学染色结果证实,该细胞具有成脂和成骨多向分化潜能。结论:应用与酶消化法相结合的改良植块法可以获得hUC-MSCs,比传统植块法缩短了原代培养周期,提高了细胞培养效率,所获得细胞贴壁生长,增殖能力强,表达间充质干细胞相关免疫表型,具有多向分化潜能,可在科研和临床应用中作为种子细胞来源。
【作者单位】： 江苏大学附属医院皮肤科;
【关键词】： 脐带间充质干细胞 原代培养 诱导分化
【基金】：国家自然科学基金资助项目(30972663)
【分类号】：R329.2
【正文快照】： 间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是中胚层来源的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的多能干细胞[1-2],可在体外培养扩增,并能在特定条件下分化为成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞、神经细胞等[3-4]。自从Friedenstein等[5]从骨髓中发现MSC以来,研究人员目前已从全身

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