Calcein-AM荧光扫描测定细胞毒方法的建立

发布时间：2017-08-05 07:30

本文关键词：Calcein-AM荧光扫描测定细胞毒方法的建立

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【摘要】：目的:建立和优化基于钙黄绿素-AM(Calcein-AM)荧光扫描的细胞毒测定方法。方法:首先使用Calcein-AM染色靶细胞,扫描检测Calcein-AM荧光值,确定Calcein-AM最佳激发波长和发射波长;然后优化Calcein-AM染色的浓度和时间;最后以效靶比为30∶1~1∶1,共孵育时间为4 h,荧光扫描测定靶细胞裂解的百分率。结果:荧光染料Calcein-AM能有效标记靶细胞,最佳激发波长和发射波长为485 nm和515 nm;Calcein-AM对细胞毒性低,不影响细胞活性;4 h内的自发释放率低于15%;CIK(Cytokine induced killer)效应细胞与靶细胞共孵育4 h的细胞毒效应随效靶比增加而升高。结论:建立和优化了Calcein-AM荧光染料标记靶细胞检测细胞毒效应的方法,该方法可避免放射性试剂的应用,对细胞毒性低,准确性高。
【作者单位】：广东药学院生命科学与生物制药学院/广东省生物技术候选药物研究重点实验室;
【关键词】： Calcein-AM 细胞毒 荧光释放测定
【基金】：国家自然科学基金(31100664) 国家重大科技专项“重大新药发展”(2009ZX09103-708)项目资助
【分类号】：R392
【正文快照】： 细胞毒T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)活性测定提供了一种了解机体细胞免疫功能和探索疾病机理的方法,而目前可以直观反映CTL效应的有51Cr释放法[1]、MTT法[2,3]、乳酸脱氢酶(LDH)释放法[4]以及流式测定方法等[5,6]。51Cr释放法由于放射性的问题国内已无操作的环境,MT

【参考文献】

中国期刊全文数据库前3条

1 张丹;南黎;任玲;张扬;薛楠;刘欢叶;;CCK-8法和MTT法评价医用抗菌不锈钢细胞毒性的比较研究[J];口腔医学;2012年01期

2 张蕾;李芳秋;张士新;黄海嵘;李德闵;;LDH释放法检测肿瘤患者PBMC和CIK细胞的细胞毒活性[J];现代检验医学杂志;2008年06期

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【共引文献】

中国期刊全文数据库前10条

1 段秀梅;谭岩;宋燕;王晓祺;刘力华;方艳秋;许淑芬;;流式细胞术检测CIK的免疫表型和体外杀伤活性[J];吉林大学学报(医学版);2006年04期

2 马林;张颖;张凯强;顾何峰;刘璐;程睿波;张思宇;;不同浓度氟化物对体外培养成釉细胞活性的影响[J];口腔医学;2013年10期

3 石平;蒋均红;;口腔材料细胞毒性评价方法的研究进展[J];中国美容医学;2014年14期

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5 李涛;孙振武;李玉晓;秦广雍;;CFSE标记技术及其在细胞研究中的应用进展[J];现代生物医学进展;2007年02期