非基因整合建立人诱导多能性干细胞方法的优化研究

发布时间：2017-08-06 13:01

  本文关键词：非基因整合建立人诱导多能性干细胞方法的优化研究

  更多相关文章： 诱导多能性干细胞 脐血 单个核细胞 Episomal载体 非整合

【摘要】：诱导多能性干细胞(iPSC)技术具有临床应用前景,但iPSC的遗传稳定性和成瘤性阻碍了其可能的临床应用。非整合质粒(Episomal)方法无外源基因整合到宿主基因组上并且方法简单,适宜推广,是目前保证iPSC遗传安全性的最佳方案之一,但其诱导效率偏低,严重阻碍了其应用。本研究旨在优化Episomal方法,将脐血单个核细胞(CB MNC)重编程为诱导多能性干细胞(iPSC),建立无基因整合的iPSC的高效生成技术体系,为以后建立疾病iPSC奠定基础。利用CB MNC,通过比较不同氧含量,诱导质粒,MNC培养方法和预刺激时间等条件对Episomal方法进行优化。结果表明:CB MNC采用红系培养液,培养8 d,使用启动子为SFFV(spleen focus forming virus)的Episomal载体,在低氧(3%)条件下诱导,CB MNC重编程效率最高,可达到0.12%。通过分析最佳条件下供体细胞成分发现,表型为CD36+CD71+CD235alow的有核红细胞是重编程最主要的供体细胞来源。结论:本研究成功建立并优化出一种可推广的高效安全的,可以用于临床应用研究的iPSC诱导技术。
【作者单位】： 中国医学科学院、北京协和医学院血液病医院、血液学研究所实验血液学国家重点实验室;
【关键词】： 诱导多能性干细胞 脐血 单个核细胞 Episomal载体 非整合
【基金】：科技部十二五支撑计划项目(2013BAI01B09) 科技部重大基础研究项目(2013CB966902,2010CB945204) 国家自然科学基金项目(81090410,81330015) 天津市科委基础项目(11JCZDJC27900,13JCYBJC39400)
【分类号】：R329.28
【正文快照】： 2006年,Yamanaka等[1]通过逆转录病毒把外源基因导入到小鼠的成纤维细胞中,首次使之重编程为多能性干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSC),2007年这项技术成功地将人的成纤维细胞重编程为iPSC[2-3]。体细胞重编程技术对再生医学具有重大的意义,由患者自体细胞诱导的iPS

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 王娅婕;郝莎;袁卫平;程涛;;诱导性多能干细胞免疫原性的发生机制与干预对策[J];中国细胞生物学学报;2013年04期

2 张权娥;刘淑平;刘延风;张鸿雁;袁卫平;陈桂彬;李彦欣;许静;;非整合型质粒重编程脐带血CD34~+细胞形成诱导性多潜能干细胞的研究[J];中国实验血液学杂志;2013年03期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 杜勇;严缘昌;李逸平;;精原干细胞及其研究进展[J];生殖与避孕;2011年08期

2 李丽娜;;控制人类诱导多能干细胞多能性和决定早期细胞命运的信号通路[J];中国病理生理杂志;2011年05期

3 王一阳;;Nanog稳定胚胎干细胞的多能性以及调节生殖细胞的形成[J];中国病理生理杂志;2008年03期

4 李扬;林昌盛;王莉;刘英;牟晓宁;马跃;李凌松;;明胶铺底培养人胚胎干细胞的初步研究[J];科学通报;2009年18期

5 华进联,窦忠英,李松,屈雷;人胚胎干细胞研究进展[J];中国科学基金;2000年02期

6 冯立新;陈向峰;;精原干细胞去分化和多能性的研究进展[J];中华男科学杂志;2009年05期

7 ;维持干细胞多能性关键基因被发现[J];健康生活;2010年07期

8 ;干细胞读本[J];中国烧伤创疡杂志;2000年03期

9 山中伸弥;黄燕;;特定因子诱导多能干细胞[J];生命科学;2010年03期

10 黄海霞,汤雪明;成体干细胞多能性研究进展[J];生命科学;2002年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 庄淑珍;董武子;窦忠英;;Nanog—维持ES细胞多能性的关键因子[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年

2 华进联;刘雨潇;董武子;窦忠英;;人类羊水源类ES细胞多能性干细胞的分离培养[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年

3 贺晨;;干细胞研究近况[A];2005年浙江省医学病毒学、医学微生物与免疫学学术会议论文汇编[C];2005年

4 江儒章;葛坚;黄冰;宋革;孙雪荣;张跃红;何媛;;异种嵌合体模型研究恒河猴表皮干细胞分化多能性[A];中华医学会第十二届全国眼科学术大会论文汇编[C];2007年

5 房佰俊;宋永平;张莉;魏旭东;胡杰英;赵春华;;脐带源间充质干细胞分离纯化及其生物学特性的初步研究[A];第10届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2005年

6 范力星;冀凯宏;熊俊;胡凯猛;刘厚奇;;骨髓源性多能干细胞(MMSC)向多巴胺能神经元的体外分化[A];中国解剖学会第十一届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文汇编[C];2009年

7 周琪;;多能性细胞研究及其在再生医学领域的应用进展[A];第九届中国实验动物科学年会（2010新疆）论文集[C];2010年

8 曾辉;Jung Woo Park;郭敏;徐仁和;陈方平;;ABCG2缺失是人多能干细胞的一个新的显著特征[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

9 秦洁;张艳敏;郭新;漆正宇;蔡志明;桂耀庭;;EZH2在iPS细胞向PGC分化进程中的表观调控机制[A];2011中国（威海）干细胞与组织工程治疗前沿论坛论文集[C];2011年

10 邹立津;;骨髓间充质干细胞体外自发恶性转化[A];中华医学会烧伤外科学分会2009年学术年会论文汇编[C];2009年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 记者 王丹;维持干细胞多能性关键基因被发现[N];健康报;2010年

2 本报记者 冯卫东;向左分裂向右分化[N];科技日报;2009年

3 记者 冯卫东;睾丸干细胞仅具备多能细胞部分特性[N];科技日报;2009年

4 常丽君;新方法能控制干细胞按需分化[N];科技日报;2011年

5 毛磊；颜亮;打开治疗性克隆应用的大门[N];中国医药报;2004年

6 陈列欢;造血干细胞 能分化成神经干细胞？[N];医药经济报;2003年

7 黎彬;可维持干细胞增殖能力的蛋白[N];中国医药报;2003年

8 冯卫东;科学家分离出人类胚胎中胚层祖细胞[N];科技日报;2010年

9 毛磊;人类胚胎干细胞首次克隆成功[N];医药经济报;2004年

10 刘霞;制造诱导多功能干细胞再现新方法[N];科技日报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 顾奇;多能性干细胞培养环境和多能性的相关研究[D];东北农业大学;2013年

2 赵明涛;猪皮肤来源前体细胞多能性的分子机制[D];西北农林科技大学;2010年

3 胡挺松;生殖干细胞与肿瘤干细胞多能性及分裂机制的研究[D];第二军医大学;2009年

4 杜丽丽;十二种疾病特异的iPS系和血小板无力iPS疾病模型的建立以及hESCs胞质中重编程相关因子的检测[D];中南大学;2012年

5 吴蓉蓉;人胚胎干细胞建系，鉴定及分化为多能性间充质样前体细胞[D];浙江大学;2009年

6 许丹;胚胎干细胞参与形成的融合细胞对损伤肝细胞作用的研究[D];南京农业大学;2009年

7 刘娜;Nanog在胚胎干细胞自我更新中的作用机制研究[D];中国协和医科大学;2008年

8 许杰;小鼠iPS细胞的诱导以及白血病抑制因子在细胞重编程过程中的作用机制研究[D];华中科技大学;2010年

9 张文成;细胞重编程与诱导内胚层多能干细胞的获取与鉴定[D];中国人民解放军军事医学科学院;2012年

10 曲鑫建;多顺反子质粒载体重编程脂肪间充质干细胞为诱导多能干细胞[D];大连理工大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 赵小玉;小鼠诱导多能性干细胞传代培养中染色体不稳定的研究[D];中国科学技术大学;2011年

2 黄伟;小鼠MSCs多能性及其与颗粒细胞相互影响的研究[D];暨南大学;2011年

3 许震宇;组蛋白修饰因子CARM1调控人胚胎干细胞多能性分子机制的研究[D];第二军医大学;2012年

4 董迪飞;稳定表达转录因子FoxA1或FoxM1对干细胞多能性及其分化潜能影响的研究[D];湖南大学;2011年

5 凌占业;人与猕猴不同组织多能性干细胞相关基因和标志抗原的表达分析[D];四川农业大学;2011年

6 彭敏锋;小鼠Oct4基因的克隆及其真核表达载体的构建[D];南昌大学;2008年

7 何斯佳;转录辅助抑制因子Grg3参与干细胞多能性基因OCT4转录调控机理初探[D];湖南大学;2012年

8 林长贵;慢病毒载体介导nanog基因修饰小鼠骨髓间充质干细胞[D];福建医科大学;2008年

9 李宏宇;不同来源体细胞诱导形成多能性干细胞（iPS）的比较研究[D];福建医科大学;2012年

10 陈晓芳;汇合依赖型体细胞重编程模型及其初步验证[D];山东大学;2012年

，

本文编号：629905