粉尘螨1类变应原T和B细胞表位t合基因的构建与表达

发布时间：2017-08-07 06:14

  本文关键词：粉尘螨1类变应原T和B细胞表位t合基因的构建与表达

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【摘要】：目的构建粉尘螨1类变应原(Der f 1)的T和B细胞表位嵌合基因原核表达载体。方法将Der f 1包含的5个T细胞表位(T1~T5)和6个B细胞表位(B1~B6),以B1-T1-B2-T2-B3-T3-B4-T4-B5-T5-B6和B1-B2-B3-B4-B5-B6-T1-T2-T3-T4-T5连接方式直接合成表位嵌合基因,并分别命名为Der f 1A和Der f 1B。构建原核表达重组质粒pET-28a(+)-Der f 1A和pET-28a(+)-Der f 1B,双酶切及测序验证的阳性克隆转化到E.coli BL21(DE3)后诱导表达。SDS-PAGE分析表达产物后进行纯化,并进行Western blotting鉴定。ELISA法检测嵌合蛋白对粉尘螨过敏患者血清IgE抗体的结合力。结果双酶切及测序结果表明,成功构建了原核表达重组质粒pET-28a(+)-Der f 1A和pET-28a(+)-Der f 1B;SDS-PAGE分析表明,Der f 1A和Der f 1B诱导并纯化成功,Western blotting结果进一步证实纯化了Der f 1A和Der f 1B嵌合蛋白。与Der f 1相比,Der f 1A和Der f 1B嵌合蛋白与粉尘螨过敏患者血清IgE抗体的结合能力显著降低(P均0.05),但Der f 1A和Der f 1B间差异无统计学意义(P0.05)。结论成功表达了Der f 1的T和B细胞表位嵌合蛋白,为粉尘螨过敏的特异性免疫治疗奠定了基础。
【作者单位】： 安徽理工大学医学院病原生物学教研室;
【关键词】： 粉尘螨 粉尘螨类变应原 T细胞表位 B细胞表位 免疫印迹试验
【基金】：国家自然科学基金(81270091、30872367) 安徽省自然科学基金(070413088)
【分类号】：R392
【正文快照】： 过敏性哮喘(哮喘)是临床常见病和多发病,全世界约有3亿人患有哮喘,其发病率和患病率呈逐年上升趋势[1-3]。尘螨是引起哮喘最主要的气传性变应原之一[4-5],其中与人类变态反应性疾病联系最紧密的主要是粉尘螨和屋尘螨。已报道的尘螨变应原已超过30种,其中最重要且研究较多的主，

本文编号：633165