结核分枝杆菌CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原真核共表达载体的构建与表达

发布时间：2017-08-11 08:37

  本文关键词：结核分枝杆菌CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原真核共表达载体的构建与表达

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【摘要】：CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B是结核分枝杆菌的主要免疫优势抗原。为了构建一种可同时表达这4种抗原的真核多基因共表达载体pcDNA-CFP10-ESAT6-Ag85A-Ag85B(pcDNA-CEAB),并利用HEK 293T细胞对其体外表达进行检测。采用酶切、连接的方法,将CFP10和ESAT6编码基因以(Gly4Ser)3蛋白Linker连接,插入至质粒pcDNA3.1(+)多克隆位点CMV启动子与加尾信号BGH pA之间,使两者融合表达,将Ag85A和Ag85B编码基因以内部核糖体进入位点(Internal ribosome entry site,IRES)序列连接,并赋予RSV启动子和加尾信号BGH pA,使两者在RSV启动子作用下独立表达。重组质粒经酶切及测序验证后转染至HEK 293T细胞中进行体外表达实验,48 h后提取总蛋白,利用CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B特异性抗体进行Western blotting检测。结果显示多基因共表达载体pcDNA-CEAB在真核细胞HEK 293T中得到表达,且CFP10、ESAT6、Ag85A和Ag85B抗原能被相应的特异性抗体所识别,表明质粒pcDNA-CEAB构建正确,这为进一步研究其免疫原性和免疫保护效果奠定了基础。
【作者单位】： 宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室;
【关键词】： 结核分枝杆菌 优势抗原 共表达 蛋白免疫印迹
【基金】：国家重点基础研究发展计划(973计划)(Nos.2012CB126301,2012CB518801) 国家自然科学基金(No.31160515) 高等学校博士学科点专项科研基金(No.20126401110001) 国家科技支撑计划项目(No.2012BAD12B07-4)资助~~
【分类号】：R378;S852.61
【正文快照】： 结核病(Tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的慢性致死性人兽共患性传染病。据世界卫生组织估计,全世界大约有1/3的人群感染MTB。近年来,随着多重耐药性菌株的不断出现,MTB与艾滋病共感染等情况更加剧了全球结核病负担[1-2]。我国是世界上

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 卢杰;张珈敏;林美娟;曹旭;胡远扬;;RNA病毒翻译调控元件——内部核糖体进入位点(IRES)[J];中国生物化学与分子生物学报;2007年07期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 Qingtao Jiang;Jing Zhang;Xia Chen;Mei Xia;Yanlai Lu;Wen Qiu;Ganzhu Feng;Dan Zhao;Yan Li;Fengxia He;Guangyong Peng;Yingwei Wang;;A novel recombinant DNA vaccine encodingMycobacterium tuberculosis ESAT-6 and FL protects againstMycobacterium tuberculosis challenge in mice[J];The Journal of Biomedical Research;2013年05期

2 蔡燕飞;朱瑞宇;陈蕴;金坚;;脑心肌炎病毒(EMCV)的内部核糖体进入位点活性的研究[J];中国生物工程杂志;2011年02期

3 陈媛媛;谭晓华;马晶莹;;人白细胞介素12腺病毒载体构建及在人骨髓间充质干细胞中的表达[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年23期

4 张国只;韩日畴;;蜜蜂囊状幼虫病研究进展[J];中国生物防治;2008年S1期

5 李武;邓光存;刘晓明;王玉炯;;结核分枝杆菌Ag85A和Ag85B基因真核共表达载体的构建与表达(英文)[J];中国人兽共患病学报;2013年08期

中国博士学位论文全文数据库 前4条

1 林美娟;茶尺蠖小RNA病毒RNA依赖的RNA聚合酶功能研究及全长cDNA克隆构建[D];武汉大学;2009年

2 于学东;登革4型病毒基因组5’端SLB和cHP二级结构对复制和翻译的调控作用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年

3 马玺;r-hCG的研制及其相关分子对肿瘤细胞体外生长的影响[D];中国人民解放军军事医学科学院;2008年

4 程振云;茶尺蠖小RNA病毒非结构蛋白2C的功能研究[D];武汉大学;2012年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 蔡燕飞;P-糖蛋白mRNA中IRES序列分析及与肿瘤多药耐药性关系研究[D];江南大学;2011年

2 周亮;蜜蜂囊状幼虫病病毒基因组序列测定与分析[D];吉林农业大学;2011年

3 黄俊华;一种基于细胞内转录的猪瘟病毒快速拯救系统[D];中国农业科学院;2011年

4 程健;中蜂囊状幼虫病毒辽宁毒株的结构蛋白鉴定及杆状病毒表达载体的构建[D];辽宁医学院;2011年

5 马元鹏;肠道病毒71型VP1基因和5’非编码区核酸序列分析[D];郑州大学;2011年

6 朱晓西;pIRES2-EGFP-hIL-12-HSP70真核表达载体的构建及对7402肝癌细胞生长的影响[D];遵义医学院;2011年

7 杨亮;以Vif降解hA3G为靶点的抗HIV-1药物筛选模型应用[D];中国协和医科大学;2009年

8 陈媛媛;hIL-12腺病毒载体的构建及在人hBMSCs中的表达[D];山西医科大学;2010年

9 曲栗;基于逆转录病毒载体的表达克隆法的建立[D];东北农业大学;2010年

10 袁率珍;鸭肝炎病毒抗原性鉴定及相关基因分析[D];中国兽医药品监察所;2010年

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 王丽梅;分枝杆菌esat-6家族研究进展[J];国外医学.流行病学.传染病学分册;2003年06期

2 曾林子;陈建平;刘成君;李红霞;姚卫;杨志荣;;结核分枝杆菌RD1区PPE68/GST融合蛋白表达质粒的构建及表达[J];第四军医大学学报;2007年01期

3 廖丹;谢建平;王洪海;;结核分枝杆菌膜蛋白的异源表达与纯化研究进展[J];微生物学报;2007年05期

4 张果,孙荪,梁明珠,王超,王冠,葛新,邬强,马郁芳;结核分枝杆菌鼠李糖基转移酶基因(wbbL)的克隆和表达[J];大连医科大学学报;2004年04期

5 韩笑;杜培革;;结核分枝杆菌中能模拟DNA的氟喹诺酮耐药蛋白[J];国外医学(药学分册);2006年01期

6 邬强;辛毅;马郁芳;;结核分枝杆菌wbbL蛋白质可溶性表达及鉴定[J];中国公共卫生;2009年10期

7 李子玲,康晓明,杨毓华,罗文侗,叶曜芩,黄鹰;应用三重PCR方法快速特异性检测并鉴别结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌DNA[J];中华微生物学和免疫学杂志;1998年02期

8 李燕,杨正林,李明远;结核分枝杆菌耐药性的分子机理研究进展[J];微生物学免疫学进展;2000年02期

9 黄健;;结核分枝杆菌诱导单核/巨噬细胞凋亡:早期膜变化与胞内结核分枝杆菌活力[J];国外医学(微生物学分册);2001年05期

10 刘敬华,Christine Pourcel,赵秀芹,万康林,刘志广,张媛媛,王庆,谭云洪,许卫国;7个VNTRs用于65株中国分离的结核分枝杆菌基因多态性研究[J];中华微生物学和免疫学杂志;2004年09期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 张月新;辛毅;马郁芳;;结核分枝杆菌RmlB的表达、纯化及酶促反应动力学研究[A];2008年全国糖生物学学术会议论文摘要[C];2008年

2 林志雄;贾坤;罗长保;鱼海琼;陈茹;赵吟;谢凯英;李守军;;牛分支杆菌与结核分枝杆菌基因芯片检测探针的筛选[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集（下册）[C];2009年

3 周培富;谢建平;;结核分枝杆菌双组份调控系统概况[A];重庆微生物学会第九届会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2009年

4 赵全菊;谢建平;;结核分枝杆菌蛋白酶毒力因子的分子遗传研究[A];遗传学与社会可持续发展——2010中国青年遗传学家论坛论文摘要汇编[C];2010年

5 朱明利;;分枝杆菌L型及其检测方法研究进展[A];2007年浙江省医学病毒学、医学微生物与免疫学学术年会论文汇编[C];2007年

6 吴园;胡频频;王易伟;李秀全;毛旭虎;钟敏;;结核分枝杆菌Rv0341蛋白编码基因iniB的多态性分析[A];2010年中国防痨协会临床/基础专业学术大会汇编[C];2010年

7 刘毅;邱云青;田苗;张旭霞;李妍;任卫聪;魏荣荣;李传友;;结核分枝杆菌持留蛋白的初步应用研究[A];中华医学会结核病学分会2010年学术年会论文汇编[C];2010年

8 王u&民;郭艳铃;刘洋;;结核分枝杆菌基因分型技术[A];2005年中国防痨协会全国学术会议论文集[C];2005年

9 陈恬;谢建平;;结核分枝杆菌PE_PGRS蛋白研究[A];重庆微生物学会第九届会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2009年

10 廖丹;胡昌华;谢建平;;结核分枝杆菌中表面活性物质胁迫应答相关基因的筛选及功能鉴定[A];首届全国微生物基因组学学术研讨会会程与论文摘要集[C];2006年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 记者 陈青;让结核菌三天内原形毕露[N];文汇报;2009年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 孙秀丽;植物基因表达数据库的构建及共表达分析研究[D];吉林大学;2013年

2 乐军;耐药结核分枝杆菌的多维分析[D];复旦大学;2003年

3 姜晓颖;北京地区结核分枝杆菌基因分型及与耐药性关系的研究[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2012年

4 罗涛;结核分枝杆菌北京家族菌株的起源、进化及其与现代人类迁移的联系[D];复旦大学;2012年

5 范雄林;结核分枝杆菌基因疫苗的构建及其免疫学特性的初步研究[D];第四军医大学;2001年

6 赵明才;结核分枝杆菌喹诺酮耐药基因功能研究[D];四川大学;2005年

7 彭超;结核分枝杆菌Mtb9.9家族蛋白免疫功能的研究[D];复旦大学;2011年

8 王杉;计算模拟解析P450单加氧酶结构功能和植物细胞壁合成相关基因识别[D];吉林大学;2011年

9 樊博;结核分枝杆菌PE、PPE家族部分蛋白多肽免疫原性的初步研究[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2010年

10 薛莹;结核分枝杆菌Rpf样蛋白生物学及免疫学活性的研究[D];第四军医大学;2005年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 蔡溢;结核分枝杆菌RmlA的表达、纯化以及酶促反应动力学研究[D];大连医科大学;2006年

2 王琳;结核分枝杆菌ClpX和ClpP2蛋白酶的克隆表达及其性质研究[D];西南大学;2010年

3 宋宇;结核分枝杆菌MurA的优化表达及功能分析[D];大连医科大学;2010年

4 郝方;结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶基因的克隆表达及酶学性质研究[D];宁夏医学院;2005年

5 黄春;新疆地区结核分枝杆菌临床分离株致病相关基因的筛选[D];石河子大学;2007年

6 王晓琳;结核分枝杆菌PPE家族免疫相关蛋白PPE68免疫功能的研究[D];四川大学;2005年

7 柏银兰;结核分枝杆菌分泌蛋白MPT64的表达、纯化及免疫学特性的初步研究[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年

8 阴灵芳;结核分枝杆菌利福平耐药菌株rpoB基因突变的分析[D];西北大学;2003年

9 高雪;结核分枝杆菌FurA的基因表达及单克隆抗体的制备[D];第四军医大学;2005年

10 姚炜;结核分枝杆菌热休克蛋白Hsp60编码基因的克隆与原核表达[D];华中科技大学;2006年

，

本文编号：655185