miR-638慢病毒载体的构建及其对MAPK14的靶向调控作用

发布时间：2017-08-18 07:27

  本文关键词：miR-638慢病毒载体的构建及其对MAPK14的靶向调控作用

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【摘要】：目的构建miR-638慢病毒过表达载体,探讨其对MAPK14基因的靶向调控作用。方法分别构建pSicoR-miR-638及pMIR-Report-MAPK14过表达载体,应用双荧光素酶报告基因活性、Western blot及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法验证miR-638与MAPK14的靶向调控关系。结果经PCR、酶切及测序结果证明成功构建了pSicoR-miR-638及pMIR-ReportMAPK14重组质粒,并通过实验证实miR-638过表达明能显抑制MAPK14的蛋白及mRNA表达(P0.05);抑制miR-638的表达,则MAPK14蛋白及mRNA的表达水平明显上调(P0.05)。结论成功构建pSicoR-miR-638慢病毒载体,并证实其可通过靶向作用于MAPK14-3’UTR的特异序列而直接抑制MAPK14基因的表达。
【作者单位】： 宁夏医科大学检验学院;宁夏医科大学总医院医学实验中心;
【关键词】： microRNA miR- MAPK
【基金】：国家自然科学基金(31160494) 教育部“新世纪优秀人才支持计划”项目(NCET11-11023) 中国博士后特别基金项目(2012T50834) 中国博士后基金项目(20110491554)
【分类号】：R392
【正文快照】： microRNA(miRNA)是近年来发现的一类长约为18~25个核苷酸的内源性非编码单链小分子RNA,其表达具有高度的组织特异性、保守性和时序性;miRNA主要通过碱基互补匹配原则,结合mRNA的非编码区导致靶mRNA降解,也可通过与靶mRNA3’UTR结合,阻遏基因转录后的翻译过程[1],从而参与细胞

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本文编号：693345