自身免疫性甲状腺疾病动物模型的建立及抗炎治疗的研究

发布时间：2017-08-18 15:02

  本文关键词：自身免疫性甲状腺疾病动物模型的建立及抗炎治疗的研究

  更多相关文章： AITD Graves病 甲状腺相关性眼病 IL-6 木犀草素

【摘要】：目的建立自身免疫甲状腺疾病(AITD)中Graves病(GD)和甲状腺相关性眼病(TAO)的动物模型,以IL-6/STAT1、STAT3为靶点研究木犀草素对小鼠自身免疫性甲状腺炎(EAT)的抗炎作用。方法第一部分：20只8周龄雌性BALB/c小鼠共分为3组,造模组(T289组)10只,对照组(pcDNA3.1组)5只和空白组(Control组)5只。使用过表达TSHR A亚单位的重组质粒pcDNA3.1-TSHR289对T289组和pcDNA3.1组小鼠进行基因免疫,免疫后立即给予电穿孔法进行体内转染,每3周1次,共免疫4次,末次免疫后第1周使用7.0T微型MRI仪检测免疫组和空白组小鼠眼球及眼外肌的变化,末次免疫后第2周处死小鼠。ELISA法检测小鼠血清总T4、TRAb抗体水平,甲状腺和眼部组织病理切片行HE染色、免疫组化和阿辛蓝染色。第二部分：将30只8周龄雌性C57BL/6小鼠分为4组,分别为造模组(TG组)10只、木犀草素(Luteolin组)组10只、地塞米松组(阳性对照组,DEX组)和空白组(Control组)各5只。将100μg的猪甲状腺球蛋白(pTG)(浓度1mg/ml)和100μl的弗氏完全佐剂完全乳化之后,给予TG组、Luteolin组和DEX组小鼠皮下注射(100μg/只)。第14天,再使用同样剂量的pTG和弗氏不完全佐剂乳化,给予以上组小鼠第二次皮下注射。从末次注射后第1天开始,每天分别给予木犀草素组和地塞米松组小鼠腹腔注射相应的药物,木犀草素剂量为10mg/kg/day,地塞米松剂量为5mg/kg/day,空白组给予PBS。用药7天后,在第21天处死小鼠。ELISA法检测小鼠血清总T4、TGAb抗体水平,甲状腺切片行HE染色。同时建立Raw264.7细胞炎症模型：将体外培养的Raw264.7细胞接种到6孔板, 加入IFN-γ(10ng/ml)培养过夜。第二天加入木犀草素(20μmol/l)处理6h。注意设置对照组及空白组。提取细胞内总蛋白,行western blot检测细胞内的STAT1、STAT3、环氧合酶2(COX2)的蛋白水平。结果第一部分：约80%的造模小鼠出现了甲状腺功能亢进的表现,包括甲状腺肿、病理学上甲状腺滤泡上皮细胞明显的肥大和增生及轻微的甲状腺炎、血清中T4水平和TRAb水平的显著上升。同时也观察到造模小鼠眼裂增宽(约30%)、MRI显示眼外肌体积增大、眼外肌中T淋巴细胞的浸润(约50%)及透明质酸的聚集(约30%),均符合人类Graves甲亢与眼病的表现,成功构建了GD与TAO的小鼠模型。第二部分：成功构建了EAT模型,40%左右的造模组小鼠均有甲状腺不同程度的肿大。50%左右造模组小鼠的甲状腺HE染色出现单核细胞的浸润,Luteolin组、DEX组(阳性对照)和Control组小鼠无单核细胞的浸润。甲状腺免疫组化结果显示木犀草素显著减少甲状腺内STAT1与STAT3的表达。Raw264.7巨噬细胞模型中,木犀草素明显抑制IFN-y诱导的细胞内COX2、磷酸化STAT3(Y705位点)和磷酸化STAT1(Y701位点)的升高,而总STAT3和STAT1保持不变。结论本实验成功构建了Graves甲亢和TAO小鼠模型,为Graves病发病机制与新型药物的研究提供了一个很好的工具。木犀草素抑制了EAT早期甲状腺内单核细胞的浸润,减轻甲状腺上皮细胞的破坏,为HT的早期干预药物的研究提供了新的思路。
【关键词】：AITD Graves病 甲状腺相关性眼病 IL-6 木犀草素
【学位授予单位】：南京大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R581;R-332
【目录】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 缩略词表10-11
• 第一章 综述：AITD发病机制的最新进展11-30
• 引言11
• 1 遗传因素11-12
• 2 环境因素12-13
• 3 自身免疫机制13-17
• 4 甲状腺相关性眼病(TAO)17-20
• 5 结论20
• 参考文献20-30
• 第二章 Graves病及Graves眼病动物模型的建立30-54
• 引言30-31
• 1 实验材料31-33
• 2 实验方法与步骤33-41
• 3 实验结果41-49
• 4 讨论与结论49-51
• 参考文献51-54
• 第三章：木犀草素对实验性自身免疫性甲状腺炎抗炎疗效的研究54-72
• 引言54-55
• 1 材料与仪器55-56
• 2 实验方法与步骤56-58
• 3 实验结果58-64
• 4 讨论64-66
• 5 结论66
• 参考文献66-72
• 致谢72-73
• 硕士期间发表的文章73-74
• 附录74-77

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈华新;于少硕;周维明;张意;;shRNA静默CD4~+ T细胞AHNAK1基因对小鼠甲状腺相关性眼病进程的抑制作用[J];国际眼科杂志;2014年02期

2 Aruna Dharmasena;;Selenium supplementation in thyroid associated ophthalmopathy: an update[J];International Journal of Ophthalmology(English Edition);2014年02期

3 赵灵芳;宋荣华;张进安;;硒剂治疗自身免疫性甲状腺病的研究进展[J];国外医学(医学地理分册);2014年02期

4 代佳灵;何为民;;眼眶成纤维细胞与甲状腺相关眼病研究进展[J];国际眼科杂志;2015年06期

5 曾程程;魏锐利;牟旆;王秋红;;红细胞分布宽度与甲状腺相关性眼病相关[J];第二军医大学学报;2015年06期

6 胡敬峰;王远红;李帅;高群;吕志华;;仿刺参糖胺聚糖对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响[J];中国海洋药物;2014年06期

7 魏静;田建卿;陈江辉;沈云玲;何小华;;左甲状腺素钠与夏枯草胶囊对桥本甲状腺炎的临床疗效[J];检验医学与临床;2014年24期

8 Jijie Chai;Yigong Shi;;Apoptosome and inflammasome: conserved machineries for caspase activation[J];National Science Review;2014年01期

9 于楠;高莹;;自身免疫性甲状腺炎免疫调节药物的应用[J];药品评价;2014年03期

10 Veli Yaz?s?z;;Similarities and differences between Beh，

本文编号：695194