一次性生物反应器悬浮培养HEK293细胞生产Ad-IFNγ的工艺

发布时间：2017-08-18 18:37

  本文关键词：一次性生物反应器悬浮培养HEK293细胞生产Ad-IFNγ的工艺

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【摘要】：腺病毒载体是极具发展前景的基因治疗载体之一,为获得一条新型腺病毒规模化生产工艺,研究采用5 L振荡激流式一次性生物反应器悬浮培养HEK293细胞来生产重组腺病毒载体。细胞经种子链逐步扩增后,接种至AP10生物反应器,采用CD293无血清培养基流加培养悬浮HEK293细胞,细胞密度达约2.0×106个/m L时,以30 MOI(Multiplicity of infection)感染重组Ad-IFNγ(Recombinant adenovirus-interferon gamma),48 h后收获细胞,3次冻融裂解离心收获上清病毒粗产品。采用壳蛋白免疫法快速测定粗产品滴度。结果表明,采用振荡激流式一次性生物反应器,流加HEK293细胞悬浮培养6 d,密度可达2.0×106个/m L,Ad-IFNγ粗产量达1.49×1013 IFU(Infectious unit),单细胞包装量达3 800 IFU/cell。采用阴离子交换层析法纯化重组腺病毒,回收率35.9%。建立了利用5 L激流式一次性生物反应器悬浮培养HEK293细胞生产重组腺病毒载体Ad-IFNγ的初步工艺。
【作者单位】： 中国科学院微生物研究所;中山大学附属肿瘤医院;广东省肿瘤靶向治疗新药研发企业重点实验室;广东省发展和改革委员会基因药物工程实验室;广州达博生物制品有限公司;
【关键词】： 重组腺病毒 HEK细胞悬浮培养 一次性生物反应器 分离纯化 阴离子交换层析
【基金】：广东省科技计划项目(No.2011A080502010) 十二五重大新药创制项目(No.2012ZX09401015)资助~~
【分类号】：R3416
【正文快照】： 腺病毒载体是极具发展潜力的基因治疗载体之一[1],在全球已报道1 970例基因治疗临床试验中占23.5%[2]。探索规模化、高效和可重复的符合GMP标准的重组腺病毒生产工艺,是临床试验和商业生产的迫切需求[3-5]。HEK293是最常用的腺病毒包装细胞系,传统采用微载体、纸片载体、固定

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本文编号：696173