单层培养细胞总RNA两种提取方法的比较

发布时间：2017-08-22 07:12

  本文关键词：单层培养细胞总RNA两种提取方法的比较

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【摘要】：目的探讨单层培养细胞总RNA提取过程中先行细胞消化或离心富集对所提RNA质量是否产生影响。方法培养NGF诱导的PC12细胞,采用Trizol试剂提取RNA:离心组(A)先将贴壁生长细胞经胰酶消化、离心获得细胞沉淀,加入1 ml Trizol进行RNA提取;直接组(B)将培养液弃尽后直接加入Trizol试剂(1 ml/10 cm2瓶壁)进行RNA提取;均采用琼脂糖凝胶电泳分析RNA完整性,紫外分光光度仪测定RNA浓度和OD260/OD280比值。结果凝胶电泳结果显示,直接组出现3条清晰的条带(28S、18S和5S条带),离心组在电泳末端5S区出现粗大的条带。两组OD260/OD28比值相似,约为1.6。直接组组间样品间RNA浓度相差较大。结论采用离心法和直接法提取贴壁细胞总RNA,先行细胞离心富集增加了RNA降解机会,直接法提取的RNA质量较高,考虑对后续实验的影响,直接法更优于离心法。
【作者单位】： 解放军总医院心血管外科;军事医学科学院放射与辐射医学研究所;
【关键词】： 单层培养细胞 RNA提取 离心法 直接法
【基金】：国家自然科学基金资助(81172620)
【分类号】：R346
【正文快照】： 0引言体外培养细胞的总RNA提取是开展多项现代分子生物学技术中的一项基本操作[1]。单层培养细胞总RNA提取过程中的首要步骤存在两种截然不同的操作方式:一种是先将细胞消化离心富集后再进行细胞裂解提取,仅需少量裂解液[2-3];另一种是将裂解液直接作用于贴壁生长细胞,但试剂

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

1 张世国,胡成进;单层培养细胞总RNA的快速提取方法[J];实用医药杂志;2004年04期

2 刘明;祁晓廷;;“总RNA提取和鉴定”的实验技巧及方法改进[J];生物学通报;2005年11期

3 张杰;武晶晶;赵飞飞;闫宇翔;赵志强;;不同温度和不同放置时间对总RNA提取浓度和纯度的影响[J];实验技术与管理;2013年11期

4 孟浩;彭贞;王闯;刘瑞兰;高庆华;;血液总RNA提取方法的比较[J];塔里木大学学报;2014年01期

5 沈景;宋利强;;改良TRIzol法提取肿瘤细胞琼脂克隆的总RNA[J];中国医学科学院学报;2012年02期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 陈兰英,赵桢,王晓涛,屈二军,陈建南;HSP70基因在人胃癌、食道癌及宫颈癌中高表达和癌变关系的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年04期

2 程烽;盛燕;施静艺;陈漪;徐潮;刘智;梁军;潘春明;朱忠勇;宋怀东;;重叠延伸PCR法构建UGRP1基因启动子的点突变表达载体[J];癌变.畸变.突变;2007年01期

3 温居一;张积仁;李鹏;张军;王斌;;NADH对二乙基亚硝胺所致L02人肝细胞株p53基因突变和c-erbB2基因表达的影响[J];癌变.畸变.突变;2009年05期

4 金艺凤;李铁臣;王莹;刘东华;孙珍贵;;ERCC1和XPD单核苷酸多态性与非小细胞肺癌铂类化疗敏感性的关系[J];癌变·畸变·突变;2010年05期

5 王继英;武英;郭建凤;呼红梅;张印;;莱芜黑猪保种群促卵泡素β亚基和雌激素受体基因、基因型变化情况[J];山东农业科学;2007年01期

6 陈静;胡晓辉;苗华荣;张建成;禹山林;;花生SRAP-PCR技术体系的优化[J];山东农业科学;2008年05期

7 陈长宝;朱树华;周杰;;改良CTAB法提取成熟肥城桃果实的总RNA[J];山东农业科学;2009年05期

8 葛宏华,肖亚中,姚建平;人心室肌球蛋白轻链1基因的克隆及其体外的表达与纯化[J];安徽大学学报(自然科学版);2004年06期

9 侯新东;盛桂莲;张桦;腊萍;;质粒DNA提取方法的探讨[J];安徽农学通报;2006年13期

10 朱美霞,孟艳玲,陈良兵;大豆与棉花抗性基因类似物的同源性比较及其进化分析[J];安徽农业科学;2005年02期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 朱林;江昌俊;叶爱华;李叶云;余梅;邓威威;;茶树ATP硫化酶和硒半胱氨酸甲基转移酶基因植物表达载体的构建[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年

2 徐波;张莉;李启云;王景会;姜媛媛;杨贞耐;;牛凝乳酶成熟肽基因在大肠杆菌中的表达[A];中国奶业协会年会论文集2008（下册）[C];2008年

3 刘冬光;廖娟红;于清龙;陈颖钰;陈焕春;郭爱珍;;融合蛋白Rv3872/CFP-10/ESAT-6的制备及在牛结核诊断中的初步应用[A];中国奶业协会年会论文集2009（上册）[C];2009年

4 张海龙;田兆丰;董志;张晏如;张飞云;;多花黑麦草斑驳病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达[A];2010植物免疫机制研究及其调控研讨会论文集[C];2010年

5 闫云君;蔡勇;杨江科;;基于易错POR技术的短小芽胞杆菌(Bacillus pumilus)脂肪酶YZO2的定向进化[A];节能环保 和谐发展——2007中国科协年会论文集（一）[C];2007年

6 李玫;廖宝文;;红树林湿地烷烃降解菌的分离筛选[A];第十三届中国科协年会第16分会场-沿海生态建设与城乡人居环境学术研讨会论文集[C];2011年

7 郭奕斌;陈路明;孟亚仙;王晶晶;杜传书;潘敬新;;一个广东四川家庭的IDS基因新突变[A];第六届全国优生科学大会论文汇编[C];2006年

8 于占东;赵双宜;何启伟;王翠花;牟晋华;刘春香;;抗芜菁花叶病毒转基因大白菜的研究[A];中国园艺学会第十届会员代表大会暨学术讨论会论文集[C];2005年

9 龚束芳;杨涛;车代弟;;偃麦草根茎非质体蛋白质修饰冰晶能力的观察[A];2007年中国园艺学会观赏园艺专业委员会年会论文集[C];2007年

10 王英;滕齐辉;曹慧;胡锋;崔中利;;淹水和旱作水稻土中细菌群落多样性的空间分布[A];第四次全国土壤生物和生物化学学术研讨会论文集[C];2007年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 徐荣燕;嗜热真菌糖苷酶的基因克隆、表达与分子改造[D];山东农业大学;2010年

2 殷慧群;猪诱导性多潜能干细胞的建立[D];安徽农业大学;2010年

3 杨瑞梅;单链抗体介导狂犬病毒shRNA靶向制剂的研究[D];甘肃农业大学;2010年

4 宋翠平;H5N1禽流感和鹅Ⅰ型副粘病毒分离株的生物学特性及感染性的研究[D];中国海洋大学;2010年

5 郭新军;拟黑多刺蚁肌细胞增强因子2与肌钙蛋白Ⅰ亚基基因的克隆及其在发育中的表达研究[D];陕西师范大学;2010年

6 生书晶;何首乌芪合酶基因（FmSTS）的克隆、鉴定及转化拟南芥研究[D];华南理工大学;2010年

7 梁东;苹果山梨醇代谢相关基因的分子特性研究[D];西北农林科技大学;2010年

8 朱彦涛;甘蓝型油菜Polima CMS和陕2A CMS的形态和生化特征及其胞质遗传物质的比较研究[D];西北农林科技大学;2010年

9 温武军;鲤抗菌肽基因的克隆及其功能研究[D];山东师范大学;2011年

10 王秀娟;嗜热真菌纤维二糖水解酶（CBHⅠ、CBHⅡ）和内切葡聚糖酶（EGⅠ）的分子改造[D];山东农业大学;2011年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 高红梅;ETEC对断奶腹泻仔猪胃肠道紧密连接蛋白ZO-1的影响[D];华中农业大学;2010年

2 王树云;斑点叉尾洶病毒ORF6和ORF10基因的原核表达及其功能的初步研究[D];华中农业大学;2010年

3 汪艳杰;水稻polycomb基因家族甲基化状态初步检测[D];华中农业大学;2010年

4 王伟;恶臭假单胞菌表面展示细菌漆酶及对染料的脱色性能[D];华中农业大学;2010年

5 黄辉;哈维弧菌表面抗原的克隆和真核表达[D];华中农业大学;2010年

6 段龙川;产毒素多杀性巴氏杆菌重组沙门氏菌基因工程疫苗的研究[D];华中农业大学;2010年

7 龚瑞;粘附素ClfA和Cna对金黄色葡萄球菌乳腺炎的免疫保护研究[D];华中农业大学;2010年

8 刘源;猪胸膜肺炎放线杆菌双组分调控系统ΔnarQ/narP突变株构建及功能研究[D];华中农业大学;2010年

9 李善文;蟾蜍灵对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响[D];南京医科大学;2009年

10 辛宁;PDX-1真核表达载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达[D];郑州大学;2010年

【二级参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 ;Isolation and Identification of Cancer Stem-Like Cells from Murine Melanoma Cell Lines[J];Cellular & Molecular Immunology;2007年06期

2 吕娜;张玲;刘宁;;提取血液总RNA两种方法的比较和分析[J];东北农业大学学报;2008年08期

3 王惠娥;孙献莹;高庆华;韩春梅;沈波;武延风;;奶牛精子RNA提取[J];中国畜牧兽医;2011年03期

4 汪军;金凯舟;王娟;陈正军;胡志前;;一种高效同时提取微量组织中总RNA、DNA和蛋白的技术方法的改进[J];肝胆胰外科杂志;2012年04期

5 吴凯朝;黄诚梅;李杨瑞;杨丽涛;吴建明;;Trizol试剂法快速高效提取3种作物不同组织总RNA[J];南方农业学报;2012年12期

6 张宏山;许明;张阳;柳德斌;吴清玉;周玉祥;;小鼠心肌组织3种总RNA提取方法比较[J];临床心血管病杂志;2010年02期

7 吴艳华;李杰;高岚;魏巍;刘任;;生物组织总RNA的高效提取[J];兰州大学学报(自然科学版);2008年02期

8 王玉成;张国栋;姜静;;一种适用范围广的总RNA提取方法[J];植物研究;2006年01期

9 谢胜松;李新云;苏立杰;顾婷;赵书红;;一种简易快速鉴定动物组织总RNA质量的方法[J];农业生物技术学报;2009年02期

10 淳俊;郑彦峰;王胜华;陈放;;一种广泛适用的RNA提取方法[J];生物化学与生物物理进展;2008年05期

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 刘宁;;“RNA干扰”的功能调控机制[J];国外医学情报;2004年02期

2 袁成福;;RNA干扰及其实验方法[J];湖北民族学院学报(医学版);2005年04期

3 ;第四届全国RNA学术研讨会讯息[J];国际医药卫生导报;2005年02期

4 纪虹;孙开来;;小RNA的研究现状[J];国际遗传学杂志;2006年01期

5 陈柳青;曾学思;孙建方;;石蜡包埋皮肤组织标本中提取RNA进行逆转录PCR的研究[J];中国麻风皮肤病杂志;2006年01期

6 ;重组RNA的表达——tRNA支架的巧妙运用[J];生物医学工程研究;2007年03期

7 张义玲;魏旭斌;蔡荣;钱程;;抑制RNA沉默现象的机理及其在生物医学领域内的应用[J];生物化学与生物物理进展;2007年12期

8 赵轶卓;孙妙囡;孙德军;;牛胰脏RNA Ⅱ的制备[J];吉林大学学报(医学版);2007年06期

9 万春鹏;周寿然;左爱仁;;RNA干扰机制及其应用研究进展[J];现代生物医学进展;2008年02期

10 刘新玉;;氟喹诺酮类抗生素可增强RNA干扰的效果[J];中国医药生物技术;2008年04期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 王蕾;王秦虎;单卫星;;大豆疫霉菌小RNA通路核心组件的识别分析及突变体筛选[A];2010年中国菌物学会学术年会论文摘要集[C];2010年

2 蒋锋;王传跃;陈晓岗;;RNA干扰技术及其应用[A];中国神经科学学会精神神经专业委员会成立大会暨第一届学术会议论文集[C];2004年

3 李艳;严明;;RNA干扰[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年

4 宋尔卫;;RNA干扰疗法的开发应用:靶点选择和靶向导入[A];第四届全国RNA进展研讨会论文集[C];2005年

5 ;RNA-interference-based functional research on rat epididymis-specific gene 16 and human paternally expressed gene PEG10 and the therapeutic applications of RNA interference in HBV,SARS,liver cancer,liver fibrosis and keloid fibroblast[A];第四届全国RNA进展研讨会论文集[C];2005年

6 郭晓红;周忠孝;吴明煜;;RNA干涉的分子机制及技术研究进展[A];中国生理学会论文汇编2005年第一期[C];2005年

7 李涛;李前忠;;Prediction of RNA binding sites in proteins from sequence[A];第四届全国生物信息学与系统生物学学术大会论文集[C];2010年

8 Jian-Hua Yang;Liang-Hu Qu;;ChIPBase:decoding transcriptional regulation of long non-coding RNA and microRNA genes from ChIP-Seq data[A];生命的分子机器及其调控网络——2012年全国生物化学与分子生物学学术大会摘要集[C];2012年

9 戚益军;;植物小RNA和长非编码RNA[A];生命的分子机器及其调控网络——2012年全国生物化学与分子生物学学术大会摘要集[C];2012年

10 陈润生;;非编码RNA和RNA组学[A];第11届全国脂质与脂蛋白学术会议论文汇编[C];2012年

中国重要报纸全文数据库 前10条

1 记者 冯卫东;研究人员发现可破坏肿瘤抑制基因的小RNA[N];科技日报;2009年

2 记者 储笑抒 通讯员 盛伟;人体微小RNA有望提前发出癌症预警[N];南京日报;2011年

3 泸州医学院副教授、科普作家 周志远;“大头儿子”与环状RNA[N];第一财经日报;2014年

4 麦迪信;小分子RNA可能有大作用[N];医药经济报;2003年

5 董映璧;美发现基因调控可回应“RNA世界”[N];科技日报;2006年

6 张忠霞;特制RNA轻推一下,就能“唤醒”基因[N];新华每日电讯;2007年

7 聂翠蓉;RNA：纵是配角也精彩[N];科技日报;2009年

8 冯卫东;RNA干扰机制首次在人体中获得证实[N];科技日报;2010年

9 冯卫东　王小龙;英在地球早期环境模拟条件下合成类RNA[N];科技日报;2009年

10 记者 常丽君;新技术让研究进入单细胞内RNA的世界[N];科技日报;2011年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 邬开朗;RNA干扰在抑制病毒基因表达与复制中的作用研究[D];武汉大学;2005年

2 王立坤;RNA-seq数据的处理与应用[D];吉林大学;2012年

3 高爱保;重金属诱导长江华溪蟹RNA差异显示及定量分析[D];山西大学;2011年

4 沈梅;RNA沉默抑制子的生化和结构研究[D];北京协和医学院;2009年

5 陈祖玉;水稻内源非编码小RNA的多样性[D];武汉大学;2005年

6 刘振栋;包含假结的RNA结构预测算法研究[D];山东大学;2014年

7 李振亚;人肝脏特异性表达的小RNA-miR-122表达调控机制与功能的研究[D];中国协和医科大学;2010年

8 吕欣;嵌合型重组HCV cDNA的构建及体外转录RNA的感染特性研究[D];第四军医大学;2005年

9 赵阳洋;对具有复杂结构的伪扭结RNA的组合分析[D];南开大学;2012年

10 林美娟;茶尺蠖小RNA病毒RNA依赖的RNA聚合酶功能研究及全长cDNA克隆构建[D];武汉大学;2009年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 孙晓娜;针对HIV-1 vpr基因的RNA干扰作用研究[D];北京工业大学;2010年

2 樊梅娜;几种RNA沉默抑制蛋白的表达纯化及沉默抑制特性分析[D];山东农业大学;2012年

3 侯继业;RNA干扰技术用于流感病毒防治的探索研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年

4 林园园;乙型肝炎病毒RNA上La protein结合位点的缺失对其自身稳定性影响的实验研究[D];华中科技大学;2006年

5 周芳;家蚕细胞中RISC复合物结合小RNA的分离、鉴定与分析[D];浙江理工大学;2013年

6 黄守均;鸡的小RNA文库构建和非编码RNA的规模筛选[D];中国协和医科大学;2008年

7 陈志强;二甲亚砜通过作用于靶标RNA聚合酶提高转录活性[D];武汉大学;2005年

8 苏杨;LMW RNA分离方法改进及与人类胚胎发育相关miRNA的克隆表达[D];暨南大学;2007年

9 丁月芹;五种鼠基因组中4.5S RNA基因拷贝数的鉴定与分析[D];曲阜师范大学;2011年

10 刘中成;枣总RNA提取及mRNA差异显示技术体系的建立[D];河北农业大学;2005年

，

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