慢病毒介导uPA-siRNA重组表达载体的构建及促进兔软骨细胞增殖

发布时间：2017-08-24 09:17

  本文关键词：慢病毒介导uPA-siRNA重组表达载体的构建及促进兔软骨细胞增殖

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【摘要】：目的构建筛选出靶向特异uPA-siRNA慢病毒表达载体,感染软骨细胞后观察其对软骨细胞增殖及代谢的影响。方法根据siRNA原理设计、构建4对靶向兔uPA siRNA序列(P1、P2、P3和P4),用RT-PCR筛选出高效靶向的P2序列。各序列经慢病毒包装后,通过Lipofectamine 2000转染入兔软骨细胞后,用RT-PCR和Western blot法分别检测uPA-siRNA对细胞内uPA mRNA和蛋白表达水平的抑制效果,用CCK-8法检测uPA-siRNA对软骨细胞增殖的影响。结果成功构建4对uPA-siRNA序列并筛选出用于后续实验的高效靶向P2序列,各序列经慢病毒载体包装并成功转染到原代软骨细胞中,在感染复数(MOI)为100时感染率达到85%以上。P1、P2、P3和P4均可抑制软骨细胞中uPA基因及蛋白的表达,但P2沉默效果最好,基因抑制率达到70%,感染后软骨细胞的增殖受到促进。结论成功构建高效靶向uPA-siRNA慢病毒载体,证实其可稳定转染软骨细胞并高效抑制uPA基因表达并促进软骨细胞增殖。
【作者单位】： 华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科;新疆石河子大学医学院附属医院骨科;
【关键词】： siRNA RNA干扰 慢病毒载体 软骨细胞 增殖
【基金】：国家自然科学基金(30960387,81260453) 兵团医药卫生重点攻关项目(2013BA020) 兵团国际交流合作项目(2011BC004)
【分类号】：R346
【正文快照】： 尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-typeplasminogen activator,uPA)是丝氨酸蛋白水解酶家族的主要成员,其与uPA受体(urokinase-typeplasminogen activator receptors,uPAR)形成复合物作用于生理、病理条件下的细胞迁移、组织修复、介导细胞外基质蛋白的水解、裂解胶原蛋白酶

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

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【共引文献】

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6 赵玺;赵文;彭海洲;孙t，

本文编号：730446