抗HBsAg表位单克隆抗体的制备及HBV血清型夹心ELISA的建立

发布时间：2017-09-17 02:32

  本文关键词：抗HBsAg表位单克隆抗体的制备及HBV血清型夹心ELISA的建立

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【摘要】：目的制备抗乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)表位单克隆抗体(mAb),建立HBV血清型夹心ELISA检测方法。方法将HBsAg亚型蛋白分别免疫小鼠,通过细胞融合、高通量筛选ELISA(HTS-ELISA)筛选后得到杂交瘤细胞株并在无血清培养基中扩大培养。采用蛋白A对抗体进行纯化并测定抗体亲和力、亚型、特异性,最后建立双抗体夹心ELISA。结果HBsAg的亚型蛋白ad、adr及ayw分别免疫小鼠后,其血清效价达到1∶105。细胞融合及HTS-ELISA筛选后获得4株杂交瘤细胞株。经过纯化后得到的mAb分别命名为#2-4,#18-3,#7-7,#56-5,亲和力都在1×109L/mol以上。间接ELISA结果显示,#2-4,#18-3,#7-7,#56-5分别特异性地与HBsAg的"d,y,r,w"表位结合。用抗HBsAg"a"表位的mAb#3-11分别与这4株抗体组合,进行夹心ELISA检测。结果显示,不同的ELISA组合能特异性地检测HBsAg的"d,y,r,w"表位。结论成功制备了亲和力高、特异性好的抗HBsAg 4个表位的mAb,建立了检测HBV血清型的双抗体夹心ELISA。
【作者单位】： 东北林业大学生命科学学院;大庆麦伯康生物技术有限公司;东北林业大学大庆生物技术研究院;
【关键词】： 乙型肝炎表面抗原 单克隆抗体 表位 夹心ELISA
【基金】：黑龙江省发展高新技术产业专项资金(FW11C201) 大庆高新区科技专项资金(DQGX10ZS005)
【分类号】：R392
【正文快照】： 乙型病毒性肝炎是一种严重威胁人类生命健康的传染病之一,是一个全球性问题[1]。乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)颗粒表面的乙型肝炎表面抗原(hepatitis B virus surface antigen,HBsAg)在病毒感染后较早出现,是HBV外膜的主要蛋白[2],是提示HBV感染的最直接的标志物[3-4]

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 姚仲寅,赵惠玲,陈茜,杨书豪,贾凯,詹美云,张文英,刘崇柏,王风来;抗乙型肝炎病毒表面抗原“y”亚型及“a”组抗原决定簇杂交瘤细胞株的建立与应用[J];病毒学报;1986年03期

2 李均伦;丁正荣;赖初麟;李艳萍;陈]琳;黄果勇;黄达春;冯永贞;王福菊;;抗乙型肝炎表面抗原决定簇“d”单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其抗体的应用[J];广西医学;1987年03期

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 姚仲寅,陈茜,杨书豪,李林红,买凯,詹美云,刘崇柏,王凤来;乙型肝炎病毒表面抗原a、d、r亚型单克隆抗体的制备与应用[J];病毒学报;1988年03期

【相似文献】

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6 梁声强;杜娟;詹林盛;;HBV病毒特异性CTL在病毒清除过程中的作用[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年

7 李向明;肖亮;刘兢;;结核杆菌热休克蛋白HSP70359-610和IL-2增强了HBV多表位DNA疫苗诱导的抗病毒免疫作用[A];中国细胞生物学学会医学细胞生物学学术大会论文集[C];2006年

8 岳惠芬;陈茂伟;曹骥;苏建家;李瑗;吴一迁;;精原细胞介导法建立HBx转基因树，

本文编号：866767