人G1型轮状病毒TaqMan荧光定量检测方法的建立与应用

发布时间：2017-10-31 20:05

  本文关键词：人G1型轮状病毒TaqMan荧光定量检测方法的建立与应用

  更多相关文章： 人轮状病毒 VP基因 TaqMan荧光定量PCR

【摘要】：目的本研究旨在建立一种快速准确定量检测人G1型轮状病毒的TaqMan探针荧光实时PCR检测方法。方法以轮状病毒VP6基因为靶基因,分别设计2对引物及其相应的TaqMan探针,扩增目的片段,将目的片段克隆于PCDNA3.1+载体上,体外转录获得RNA,系列稀释后为标准品,建立TaqMan探针荧光定量实时PCR检测方法并对该方法进行验证。结果设计实验找到最优条件下的引物浓度(250nmol/L)、探针浓度(300nmol/L);通过对引起腹泻的人柯萨奇病毒、呼肠孤病毒等进行检测,结果均为阴性,表明该方法具有很好的特异性。该方法的最低检测量为5copies/μL。对该方法进行重复性实验,发现变异率均小于1%,重复性好。用已建立的方法对4份粪便临床样品进行3次重复试验,病毒RNA的检出率为100%。结论本实验初步建立了人G1型轮状病毒TaqMan探针荧光实时PCR检测方法,为G1型轮状病毒的诊断、检测和分子流行病学研究提供了一种新的方法。
【作者单位】： 昆明理工大学医学院昆明理工大学附属医院;昆明理工大学生命科学与技术学院云南省分子医学研究中心;
【关键词】： 人轮状病毒 VP基因 TaqMan荧光定量PCR
【基金】：国家科技支撑计划项目(No.2014BAI01B01)~~
【分类号】：R440;R512.5
【正文快照】： (1.The Affiliated Hospital of Kunming University of Science and Technology,Kunming650034,China2.Kunming University of Science and technology,faculty of life science and technology,Yunnan Provincial research center of molecular medicine,Kunming650034,Chin

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李晓婉;陈琦;金t，

本文编号：1123537