猪弓形虫抗体间接ELISA方法的建立及胶体金试纸条的制备

发布时间：2017-11-01 10:23

  本文关键词：猪弓形虫抗体间接ELISA方法的建立及胶体金试纸条的制备

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【摘要】：弓形虫病是一种由细胞内寄生的原虫--弓形虫引起的人兽共患病。可以感染包括人,家畜、家禽、海洋哺乳动物和鸟类等所有温血动物。猪是弓形虫重要的中间宿主,在弓形虫和弓形虫病的传播过程中起到十分重要的作用。免疫胶体金检测法(ICT)作为一种简单、便捷的血清学诊断方法,无需实验仪器及设备,无需技术人员操作,适合大量样本的初步筛选,尤其适合畜禽场及野外检测。弓形虫致密颗粒蛋白家族中的GRA7在宿主体内持续性表达,在速殖子和缓殖子阶段均可诱导机体的免疫反应,是潜在的弓形虫血清学诊断的具有较高价值的一类分泌抗原。本研究利用重组蛋白GRA7制备弓形虫抗体胶体金试纸条,为实际应用奠定基础。1.利用重组蛋白GRA7建立猪弓形虫抗体间接ELISA方法确定重组蛋白GRA7的包被浓度为5μg/mL、孵育条件为4℃过夜;最佳封闭液浓度为5%(m/v)的脱脂奶粉;猪血清和二抗的工作浓度分别为1:50和1:100,000,作用时间均为90min;TMB最佳显色时间为18min。利用该法检测176份猪血清,与胶体金准ELISA相比,特异性、敏感性分别为93.3%、83.3%,AUC曲线分析结果显示,GRA7-ELISA曲线下面积为0.922,说明该方法稳定性很好。以上结果表明:重组蛋白GRA7作为血清学诊断抗原效果良好,可应用于制备胶体金试纸条。2.利用重组蛋白GRA7制备弓形虫抗体检测胶体金试纸条重组蛋白GRA7标记胶体金的最佳浓度和最佳标记pH分别为7.5μg/mL和pH9.0。检测线(Test line)重组抗原GRA7的最佳划线浓度为1mg/mL,质控线(Control line)兔抗GRA7抗体的最佳划线浓度为1mg/mL。176份猪血清的GRA7-ICT检测结果与Gold-ELISA比较,特异性和敏感性分别是91.4%、83.0%。两种检测方法结果吻合样品的Kappa=0.7570,具有较高的一致性。
【关键词】：猪 弓形虫 重组蛋白GRA7 ELISA 胶体金
【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R531.8
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 前言7-8
• 第一章 文献综述8-16
• 1.1 弓形虫及弓形虫病8-9
• 1.2 不同人群的弓形虫感染9-10
• 1.3 猪与弓形虫传播10
• 1.4 弓形虫病诊断方法10-13
• 1.5 常用检测抗体13-14
• 1.6 弓形虫GRA7蛋白14
• 1.7 弓形虫病的预防与治疗14-16
• 第二章 利用重组蛋白GRA7建立猪弓形虫抗体间接ELISA方法16-26
• 2.1 材料16-18
• 2.2 方法18-21
• 2.3 结果21-24
• 2.4 讨论24-25
• 2.5 小结25-26
• 第三章 猪弓形虫抗体胶体金试纸条的制备26-43
• 3.1 材料26-27
• 3.2 方法27-34
• 3.3 结果34-41
• 3.4 讨论41-42
• 3.5 小结42-43
• 结论43-44
• 参考文献44-51
• 缩略词表51-52
• 作者简介52-53
• 致谢53

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本文编号：1126406