gp10基因的原核表达及其联用异烟肼的体外抗结核菌活性

发布时间：2017-11-10 01:02

  本文关键词：gp10基因的原核表达及其联用异烟肼的体外抗结核菌活性

  更多相关文章： gp10蛋白 异烟肼 结核杆菌 抗菌活性

【摘要】：目的构建分枝杆菌噬菌体D29 gp10基因重组质粒,在E. coli BL21(DE3)中表达重组蛋白gp10,检测其单用及联用异烟肼的体外抗结核菌活性,为开发结核病新药提供新的方向。方法1.以分枝杆菌噬菌体D29基因组DNA为模板,PCR扩增gp10基因,克隆至原核表达载体pET32a(+),构建重组质粒pET32a(+)-gp10,经双酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)中诱导表达重组蛋白gp10。经SDS-PAGE鉴定后,采用镍柱纯化及透析复性目的蛋白。2.利用2倍微量稀释法原理,刃天青显色法检测重组蛋白gp10对结核分枝杆菌标准株H37Rv和临床分离耐多药株的最低抑菌浓度。利用7x7微量棋盘稀释法的原理,刃天青显色法观察重组蛋白gp10与异烟肼联用针对H37Rv的部分抑菌浓度指数。结果1.gp10基因经PCR扩增获得长1479bp的条带,重组质粒pET32a(+)-gp10经EcoR I和Not I双酶切获得长约5900和1479 bp的条带,测序结果与GenBank中查找的gp10基因序列完全一致,并表达相对分子质量75.2 KDa的融合蛋白。2.重组蛋白gp10对结核分枝杆菌H37Rv和临床分离耐多药株的最低抑菌浓度为256 μg/ml,与异烟肼联用对结核分枝杆菌H37Rv部分抑菌浓度指数为0.5。结论1.成功构建原核表达质粒pET32a(+)-gp10,并在E.coli BL21(DE3)中表达gp10蛋白。2.重组蛋白gp10单用对体外结核分枝杆菌标准株H37RV和临床分离耐多药株均表现出一定抗菌活性,联用异烟肼表现出协同抗菌效应。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R52

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 孙东波;冯力;刘杰;时洪艳;佟有恩;刘胜旺;童光志;;猪传染性胃肠炎病毒n基因的原核表达及重组蛋白的免疫活性分析[J];病毒学报;2006年02期

2 张军;韩钰;蔡富强;秦烨;夏燕;王艳林;;人腺苷甲硫氨酸脱羧酶的原核表达及纯化[J];中国生物制品学杂志;2012年02期

3 薛亚军;赵耀东;董艳;蔡如珏;卢亦成;楼美清;;重组胶质细胞生长因子2蛋白的原核表达及纯化[J];生物医学工程与临床;2012年02期

4 江国春,袁丽珍,贾向旭;人睫状神经营养因子的克隆与原核表达[J];军事医学科学院院刊;1998年02期

5 宋水川,季军捷,寇庚,钱卫珠,史菊鲜,王皓,郭亚军;重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白的鉴定[J];第二军医大学学报;2004年04期

6 金蕾;张慧珍;杨继要;赵向锋;王琳;吴逸明;;铁蛋白轻链的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备[J];第二军医大学学报;2007年11期

7 曹春雨;王艳林;任玉珊;韩钰;;小鼠钙网蛋白的克隆与原核表达[J];第四军医大学学报;2008年23期

8 杨涛,杨利军,冯仟佳,程牛亮,牛勃;人肝细胞生长因子α原核表达体系的构建及表达[J];中华微生物学和免疫学杂志;2004年04期

9 任艳红;李一经;王新生;;单核细胞增生性李斯特菌溶血素基因的原核表达[J];中国人兽共患病杂志;2005年12期

10 杨海波;廖春丽;朱涛;王莲哲;陈兰英;;重组血红蛋白的原核表达、纯化和鉴定[J];重庆医学;2010年21期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 马文涛;闫若潜;吴志明;刘光辉;盛敏;谢彩华;;猪白细胞介素-6的原核表达及其生物学活性研究[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(下册)[C];2010年

2 丁梦蝶;鲁丹;王红宁;田浪;阳泰;张毅;樊汶樵;郭自成;;禽传染性支气管炎病毒多基因串联表位抗原的原核表达研究[A];四川省动物学会第九次会员代表大会暨第十届学术研讨会论文集[C];2011年

3 林海波;张桂红;詹国英;廖明;任涛;罗开健;曹伟胜;徐成刚;辛朝安;;猪白细胞介素-6基因的非融合原核表达研究[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年

4 隋桂琴;左玲;王桂云;;人碱性成纤维细胞生长因子的原核表达[A];中国眼底病论坛·全国眼底病专题学术研讨会论文汇编[C];2008年

5 黄斯勇;梁英民;韩骅;李国辉;伍艳兰;康志杰;何飞;张萍;徐恒;刘利;;人Detla-like4ext-93-217原核表达、纯化及蛋白活性检测[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

6 张红;刘志国;屈伸;;人源受体相关蛋白的原核表达优化及功能检测[A];湖北省暨武汉生物化学与分子生物学学会第八届会员代表大会和第十五次学术年会论文摘要汇编[C];2004年

7 袁志栋;王志亮;刘雨田;吴晓东;刘海生;;水貂朊蛋白前体基因的克隆与原核表达[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年

8 王士友;张耀洲;;一个新的家蚕基因的克隆、原核表达及纯化[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年

9 伍艳兰;黄斯勇;牛晓丽;张丽;陈茹菲;何飞;张萍;梁英民;刘利;;人Delta-like4ext-93-217原核表达、纯化及蛋白活性检测[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年

10 马文涛;闫若潜;吴志明;刘光辉;盛敏;谢彩华;;猪白细胞介素-6的原核表达及其生物学活性研究[A];中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第四次猪病防控学术研讨会论文集[C];2010年

中国博士学位论文全文数据库 前8条

1 张晓鸣;人IL-16的原核表达与其功能的初步研究[D];中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）;2000年

2 曹秀利;杨树PtCDD基因的原核表达及酶活分析[D];南京林业大学;2008年

3 黄新河;小鼠TAp63γ的原核表达、纯化、结构及功能初步研究[D];四川大学;2007年

4 张大鹏;VP60蛋白的原核表达、抗体制备及VP60基因转化的研究[D];西北农林科技大学;2012年

5 张少斌;豌豆肌动蛋白异型体（PEAc1）的原核表达及其藻荧光探针的研制[D];中国农业大学;2004年

6 尹国华;利用Red重组系统构建dsRNA原核表达体系抗烟草花叶病毒的研究[D];山东农业大学;2009年

7 韩凌霞;猪圆环病毒2型基因的原核表达与单克隆抗体的制备及感染性分子克隆的动物接种试验[D];中国农业科学院;2003年

8 于扬;重组人源GPx4及其模拟物的原核表达、结构与功能的研究[D];吉林大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 周鹏;结核分枝杆菌特异性蛋白的原核表达、纯化及免疫原性分析[D];安徽医科大学;2015年

2 高小磊;六种结核分枝杆菌特异性抗原的原核表达及16 KD-38 KD和Ag85A血清学诊断效果的研究[D];兰州大学;2015年

3 彭传林;家蝇抗真菌肽MAF-1原核表达体系优化与活性分析[D];贵阳医学院;2015年

4 钟树怀;猪囊尾蚴膜联蛋白的原核表达及其免疫反应性分析[D];贵阳医学院;2015年

5 孙明潭;猪繁殖与呼吸综合征病毒河北地方株ORF7基因的原核表达及ELISA方法的建立[D];河北农业大学;2015年

6 张良斌;天祝白牦牛KAP家族基因克隆、原核表达及其在皮肤中的表达分析[D];西北民族大学;2015年

7 达小强;牦牛转铁蛋白基因克隆与原核表达[D];西北民族大学;2015年

8 高翠娥;飞蝗2个CYP450转基因果蝇品系对杀虫剂的敏感性及原核表达[D];山西大学;2015年

9 吴雨航;布氏杆菌病间接ELISA方法的建立及吉林省梅花鹿主要养殖地区鹿布病血清学调查[D];吉林农业大学;2015年

10 姜旭;百合无症病毒16kDα基因的克隆、原核表达及亚细胞定位[D];大连理工大学;2015年

，

本文编号：1164346