莱姆病螺旋体毒力因子BmpA在刺激THP-1细胞产生趋化因子中的作用

发布时间：2017-11-19 06:11

  本文关键词：莱姆病螺旋体毒力因子BmpA在刺激THP-1细胞产生趋化因子中的作用

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【摘要】：[目的]以人单核巨噬细胞(THP-1细胞)为实验对象,探究伯氏疏螺旋体重组膜蛋白A(recombinant Borrelia burgdorferi membrane protein A,rBmpA)刺激免疫细胞产生促炎趋化因子风暴的假说及产生机制。并探究异佛司可林(Isoforskolin, ISOF)对rBmpA导致的炎症的抑制作用。[方法]1、96孔细胞培养板培养THP-1细胞,佛波酯(PMA)的作用下诱导成熟为巨噬细胞,加入rBmpA刺激培养48小时,在24小时和48小时时间点收集细胞培养上清液,RayBiotech抗体芯片高通量检测细胞上清中38种趋化因子分泌量。2、96孔细胞培养板培养THP-1细胞,PMA的作用下诱导成熟为巨噬细胞,加入rBmpA刺激培养48小时,在24小时和48小时时间点收集细胞培养上清液,ELISA检测细胞上清中趋化因子CXCL13、CXCL5和CCL1的分泌量。3、96孔细胞培养板培养THP-1细胞,PMA的作用下诱导成熟为巨噬细胞,加入rBmpA刺激培养48小时,在24小时和48小时时间点使用Trizol试剂裂解细胞并收集细胞裂解液,通过QRT-PCR检测CXCL13、CXCL5和CCL1基因的表达水平。4、96孔细胞培养板培养THP-1细胞,PMA的作用下诱导成熟为巨噬细胞,加入rBmpA和ISOF刺激培养72小时,在24小时、48小时和72小时时间点点使用Trizol试剂裂解细胞并收集细胞裂解液,通过QRT-PCR检测炎性细胞因子IL-6及TNF-a基因的表达水平。[结果]1、在rBmpA刺激培养后细胞上清中,RayBiotech抗体芯片检测的38种趋化因子中的14种趋化因子分泌量增高,从这14种中选择CXCL13、CXCL5和CCL1做下一步研究。2、rBmpA刺激培养48小时后细胞上清中趋化因子CXCL13、 XCL5和CCL1的分泌量增高,高浓度rBmpA刺激后分泌量增高更多。3、rBmpA刺激培养24小时后细胞裂解液中趋化因子CXCL13VCXCL5和CCL1的基因表达水平增高,高浓度rBmpA刺激后基因表达水平增高更强。4、与rBmpA处理组相比,rBmpA+ISOF组细胞裂解液中炎性细胞因子IL-6和TNF-a基因表达水平降低。[结论]1、rBmpA刺激THP-1细胞后会导致THP-1细胞的14种趋化因子分泌量增高。2、rBmpA刺激THP-1细胞后会导致THP-1细胞分泌趋化因子CXCL13、 CXCL5和CCL1的量明显的增加,并且更高浓度的rBmpA会导致THP-1细胞分泌趋化因子CXCL13、CXCL5和CCL1的量增加更多。3.rBmpA刺激THP-1细胞后会导致THP-1细胞内趋化因子CXCL13、CXCL5和CCL1的基因表达量明显的增加,并且更高浓度的rBmpA会导致THP-1细胞内趋化因子CXCL13、CXCL5和CCL1的基因表达量增加更多。4、ISOF对rBmpA导致的THP-1细胞分泌炎性因子有明显的抑制作用。
【学位授予单位】：昆明医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R514

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本文编号：1202566