特异性结合HBV EnhI的人工转录因子在体外抑制HBV的实验研究

发布时间：2017-12-03 16:35

  本文关键词：特异性结合HBV EnhI的人工转录因子在体外抑制HBV的实验研究

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【摘要】：目的：设计可特异性识别并靶向作用于HBV增强子I (Enh I)的人工转录因子(Artificial Transcription Factor, ATF),通过ATF靶向作用于HBV Enh I来抑制HBV DNA的复制与表达,为防治HBV提供新的技术方法和实验依据。方法：1.通过基因工程和生物信息学方法分析、对比HBV Enh I序列后确定最佳靶序列。设计能特异性结合HBV Enh I最佳靶序列的ATF并构建其真核表达质粒载体pcDNA3.1-ATF; 2将真核表达质粒载体转染HepG2细胞,通过酶切鉴定重组质粒的正确性,使用免疫荧光和Western-blot方法检测ATF在真核细胞内的表达情况；3.将真核表达质粒转染HepG2.2.15细胞,使用CCK-8检测ATF对细胞增殖的影响,使用ELISA、qRT-PCR方法检测ATF对HBV DNA复制与表达的抑制作用。结果：1.将pcDNA3.1-ATF转染HepG2细胞后,使用免疫荧光和Western-blot检测ATF蛋白能够正常表达。2.将真核表达质粒转染HepG2.2.15细胞后,通过CCK-8检测说明ATF对细胞增殖生长无明显的毒性作用,ELISA检测显示细胞中HBeAg分泌量明显减少,荧光定量PCR检测显示细胞内HBV mRNA含量减少。实时荧光定量PCR检测显示细胞内HBV DNA拷贝数明显下降。结论：人工设计的可特异性结合于HBV Enh I的ATF在真核细胞内正常表达,在HepG2.2.15细胞中可以有效抑制HBV DNA复制与表达,对细胞生长无明显影响。
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R512.62

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1 李中堂;特异性结合HBV EnhI的人工转录因子在体外抑制HBV的实验研究[D];重庆医科大学;2015年

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本文编号：1249352