环介导等温扩增技术检测马尔尼菲青霉菌的研究

发布时间：2017-12-04 21:04

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【摘要】：目的应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立马尔尼菲青霉菌(PM)快速检测方法,探讨该方法的特异性、敏感性等,评价其临床应用价值。方法针对马尔尼菲青霉菌的特异性基因MP1基因设计4条特异引物,反应前加入钙黄绿素荧光试剂,63℃恒温反应60min,结束后通过目视检测荧光及浊度仪检测产物浊度值判断结果;评价所建立LAMP方法的特异性和敏感性,建立标准曲线,并用LAMP法及PCR法检测样本,比较样本检出情况。结果该方法特异性良好,PM出现特异性LAMP扩增反应,而烟曲霉菌、腐皮镰刀菌、棘状外瓶酶菌、大肠埃希菌、嗜水气单胞菌、哈氏孤菌、创伤孤菌、水等均未出现扩增;检测限约为1.7×10-7 ng/μl,为PCR检测方法的10倍;以LAMP反应时间X轴,浓度的负次方数为Y轴,构建的标准曲线方程为y=0.4145x-8.9968,相关系数R2=0.9963,呈良好的线性关系;样本检测结果显示,LAMP法较PCR法获得更高的敏感性。结论 LAMP检测方法具有特异性高、敏感性高、反应时间短的特点,简便易行,适合于基层对PM的快速检测。
【作者单位】： 广西医科大学第一附属医院呼吸内科;广西水产科学研究院;
【基金】：广西卫生厅科技研究基金资助项目(Z211314)
【分类号】：R519
【正文快照】： 马尔尼菲青霉病(PSM)是一种由马尔尼菲青霉菌(PM)感染引起的一种机会感染性的深部真菌病,具有地域流行性。该病发病隐匿,临床表现复杂,治疗困难,其生存率与早期诊断密切相关。因此,快捷、高效、准确诊断PSM具有重要意义。2000年,Notomi等[1]开发了环介导等温扩增(LAMP)技术,并

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