恙虫病东方体快速检测方法的建立和评估

发布时间：2018-01-18 00:17

本文关键词：恙虫病东方体快速检测方法的建立和评估　出处：《南京师范大学》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：恙虫病(scrub typhus)是由恙虫病东方体(orientia tsutusgamushi)通过恙螨幼虫叮咬而传播的一种自然疫源性疾病。据调查,在亚太地区,大约10亿人群有潜在感染风险,每年约100万新病例出现。由于自然疫源地不断扩大,恙虫病感染已经成为亚太地区一个亟需解决的公共卫生问题。本病临床上以突发高热、淋巴结肿大、虫咬溃疡和皮疹为主要特征,轻者呈自限性流感样综合征,严重者脏器衰竭甚至死亡。若及早诊断并服用抗生素治疗,可避免并发症。但由于恙虫病的临床症状和其他热性传染病有诸多相似,极易引起误诊。传统的血清学检测法间接免疫荧光试验被称为“金标”,但需制备菌体抗原,步骤操作繁琐复杂,并且需要生物安全实验室和熟练的技术人员,在基层医疗单位应用受到很大的限制。因此,建立简便、准确、快速、敏感,适合在偏远地区、条件相对简陋的现场使用的恙虫病诊断方法,是极其必要的。近年来,随着分子生物学的发展,大量制备高纯度重组抗原成为可能,使得血清学方法检测病原体感染更为便捷,应用前景更为广阔；与血清学方法比较,核酸检测方法可以大大缩短病原体感染的“窗口期”,能更早期确诊病原体感染。恙虫病东方体外膜蛋白56kD是最重要的病原体结构蛋白,已被研究者视为恙虫病免疫学和核酸检测的重要靶标。本研究通过PCR选择性扩增出东方体合肥株和三界株编码56kD外膜蛋白部分截短基因,克隆至原核载体pET28a构建表达载体,对重组表达产物进行活性鉴定分析；以合肥株和三界56kD截短重组混合抗原作为诊断抗原,制备胶体金免疫层析诊断试剂,通过检测血样中恙虫病东方体的IgM和IgG评估其检测效能；同时,以56kD外膜蛋白基因为靶基因,研究构建了可视化环介导恒温扩增法和染料荧光定量PCR法,实现恙虫病东方体的早期灵敏检测。本研究建立的血清学和核酸检测方法均具有较好的敏感性和特异性,其中荧光定量PCR可用于恙虫病感染的实验室早期快速诊断,并可以定量评价体内东方体的感染滴度,而胶体金免疫层析法和可视化环介导恒温扩增法适用于农村、基层医院及现场的快速筛查。上述检测方法的建立可为恙虫病早期及时诊治提供技术支持。
[Abstract]:In the Asia - Pacific region , some 1 billion people have a potential risk of infection , and about 1 million new cases appear in the Asia - Pacific region . In recent years , with the development of molecular biology , a large number of high - purity recombinant antigens have become possible , so that the serological method can detect pathogen infection more conveniently and has a wider application prospect ; and compared with the serological method , the nucleic acid detection method can greatly shorten the window period of pathogen infection . In this study , 56 kD outer membrane protein ( 56 kD ) was cloned into prokaryotic expression vector pET28a as the target gene , and the recombinant expression product was cloned into prokaryotic expression vector pET28a .

【学位授予单位】：南京师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R513.2

【参考文献】