脑脊液IFN-γ及外周血T-SPOT.TB检测在结核性脑膜炎诊断中的意义

发布时间：2018-01-27 03:36

本文关键词： 结核性脑膜炎诊断 IFN-γ T-SPOT.TB　出处：《复旦大学》2013年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：[目的]结核性脑膜炎(Tuberculous meningitis, TBM)的死亡率和致残率很高,是结核病中最严重的一种类型,快速有效的诊断和早期治疗是减少病死率和致残率的关键。结核性脑膜炎的早期、准确的诊断一直是一个世界性难题。近年来发展起来T-SPOT. TB检测作为一种新型的酶联免疫斑点技术,为结核病的诊断提供了新的技术。由于具备较高的敏感性和特异性,该方法在国外已成为诊断结核感染的主要技术,但在结核性脑膜炎中的应用较少。国内外对外周血T-SPOT. TB诊断结核性脑膜炎的临床价值评价不一,本文将对此进一步研究。近年来国内外开始对脑脊液(CSF) T-SPOT. TB诊断结核性脑膜炎的价值进行研究,该诊断试验是检测脑脊液中受抗原刺激后分泌IFN-γ特异性T细胞,但由于脑脊液量及细胞数较少,限制了它在临床诊断中的应用。与脑脊液T-SPOT. TB相比,用酶联免疫吸附实验(Enzyme Linked Immunosorbent Assay, ELISA)检测脑脊液中未受刺激的IFN-γ更为简便,快速,且所需脑脊液量较少,可以为结核性脑膜炎的诊断提供一种新的辅助检测手段。目前国内外尚无同时检测结核性脑膜炎患者脑脊液INF-γ及外周血T-SPOT. TB的报道。本研究将应用酶联免疫斑点试验检测结核性脑膜炎患者外周血受结核特异性抗原刺激后分泌IFN-γ的特异性T细胞,同时用ELISA法检测脑脊液中未受刺激的IFN-γ含量,旨在比较两种诊断试验对结核性脑膜炎的临床诊断价值及判断两种试验联合诊断的价值。 [方法]病例选取2011年3月～2013年3月,复旦大学附属华山医院传染科住院病例。收集临床怀疑为TBM患者的病历资料,根据最新诊断标准进行评分,筛选出30例“确诊TBM”和“很可能TBM”为病例组(结核性脑膜炎组),对照组选取51例非结核性脑膜炎患者(非结核性脑膜炎组)。结核性脑膜炎组和非结核性脑膜炎组所有患者均留取入院后首次腰穿脑脊液lml,结核性脑膜炎组抗痨治疗4周后,经随访共有10例病人收集到治疗后脑脊液lml。所有脑脊液均在收集后即刻室温下3000转／分钟离心10分钟,取上清-80℃冻存,待进行ELISA检测脑脊液中未受刺激的IFN-γ含量。入院后2天内采集所有患者5ml新鲜抗凝外周血,离心后吸取中间层白细胞进行T-SPOT. TB检测。对结核性脑膜炎组、非结核性脑膜炎组及结核性脑膜炎组抗痨治疗4周后的脑脊液常规、生化、培养、涂片等结果进行记录并分析。 [结果] 1临床资料分析结果：符合入组标准的TBM患者30例,确诊TBM6例,很可能TBM24例,其中男性24例,女性6例,年龄18～79岁,平均为45.10±17.65岁。对照组为非TBM患者,共51例,男32例,女19例,年龄14～64岁,平均为37.73±15.30岁。结核性脑膜炎组与非结核性脑膜炎组相比,结核性脑膜炎组脑脊液平均压力、蛋白含量升高,葡萄糖、氯化物含量降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结核性脑膜炎组与非脑膜炎组相比,脑脊液平均压力、蛋白含量升高,糖及氯化物含量降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结核性脑膜炎组与病毒性脑膜炎、化脓性脑膜炎、隐球菌性脑膜炎组相比,蛋白升高、氯含量降低,但脑脊液平均压力、白细胞数、糖含量均无差异。结核性脑膜炎组治疗前后比较,脑脊液平均压力、蛋白含量、白细胞数均降低,糖及氯化物含量较治疗前升高,差异均有统计学意义(P0.05)。 2脑脊液中IFN-γ测定：结核性脑膜炎组患者入院后首次腰穿共30份脑脊液,经EL工SA法检测,IFN-γ水平为(0~1688.41) pg/ml,含量平均值为350.97±372.94pg/ml；对照组中IFN-γ水平为(0~954.83)pg/ml,含量平均值为71.30pg/ml。病例组与对照组比较有明显差异(P0.05)。30例结核性脑膜炎患者中共有10例在抗痨4周后再次收集脑脊液行ELISA法检测,该10例患者治疗前脑脊液中IFN-γ水平为(125.18~1688.41)pg/ml,平均值为500.48±504.86pg/ml；治疗4周后脑脊液中IFN-γ水平为(11.60~335.92)pg/ml,平均值为103.62±92.57pg/ml,前后比较差异有统计学意义(P0.05).IFN-γ诊断结核性脑膜炎患者ROC曲线下面积0.853,标准误0.048,95%可信区间[0.759,0.946],最佳诊断分界点81.36pg/ml,此时对应的敏感度83%,特异度88%,约登指数0.71,阳性预测值(PPV)81%,阴性预测值(NPV)90%。在结核性脑膜炎组中有5个假阴性,其中有2个病人入院前已接受过抗结核治疗(疗程均大于半年),在对照组中有6个病人脑脊液中IFN-γ水平大于界值,为假阳性病人。若剔除入院前已接受抗痨治疗的2例患者,则诊断试验的敏感度可达到89%、阴性预测值可达到94%。结核性脑膜炎组脑脊液IFN-γ含量显著高于病毒性脑膜炎组、化脓性脑膜炎组、隐球菌性脑膜脑炎组及非脑膜炎组,差异均有统计学意义(P0.05)；其他各组间脑脊液IFN-γ含量相比较无统计学差异(P0.05)。 3外周血T-SPOT.TB检测：在81例纳入患者中,外周血T-SPOT.TB检测诊断结核性脑膜炎的敏感度为70%(21/30),特异度为86%(44/51),阳性预测值为75%,阴性预测值为83%,阴性似然比为0.35,阳性似然比为5.10。结核性脑膜炎组T-SPOT.TB日性率为70%,非结核性脑膜炎组T-SPOT.TB阳性率为14%,两组阳性率有显著性差异(P0.05)。在6例确诊的结脑中有4(?)T-SPOT.TB阳性,阳性率为67%；在24例很可能的结脑中有17例T-SPOT.TB阳性,阳性率为71%,两组没有显著性差异(P0.05).T-SPOT.TB斑点形成细胞(Spot forming cells, SFCs)分布：TBM组ESAT-6形成的SFCs数的中位数(32.5个/2.5×105PBMCs)显著高于对照组(0个/2.5×105PBMCs)(P0.001).TBM组CFP-10形成的SFCs数的中位数(10个／2.5×105PBMCs)显著高于对照组(0个/2.5×105PBMCs)(P0.001)。 4脑脊液结核分枝杆菌培养及抗酸染色涂片结果：结脑组共30例,其中脑脊液结核分枝杆菌培养阳性6例,阴性24例,阳性率20%,非结脑组共51例,培养阳性为0例。脑脊液结核分枝杆菌培养的敏感度为20%(6/30),特异度为100%,约登指数为0.2,阳性预测值为100%,阴性预测值为68%。81例入选患者脑脊液抗酸染色涂片均为阴性。 5脑脊液结核分支杆菌培养、外周血LT-SPOT. TB及脑脊液IFN-γ检测的比较：外周血T-SPOT. TB检测、脑脊液中IFN-γ检测及脑脊液结核分支杆菌培养三种诊断试验中,脑脊液中IFN-γ检测的敏感度最高为83%,因此其阴性预测值也最高为90%,在入院时未接受抗结核治疗的患者中敏感度可达到89%、阴性预测值可达到94%；脑脊液结核分支杆菌培养的特异度最高为100%,敏感度最低仅为20%。 6外周血T-SPOT. TB及脑脊液IFN-γ联合检测的比较：脑脊液IFN-γ检测的敏感度、特异度均高于外周血T-SPOT. TB,但差异均无统计学意义(P0.05)。外周血T-SPOT. TB及脑脊液IFN-γ检测至少有一项阳性时,诊断TBM的敏感度增高达90%,阴性预测值达93%,但特异度及阳性预测值较低,分别为75%、68%。外周血T-SPOT. TB及脑脊液IFN-Y检测两项均阳性时,诊断TBM的特异度较高为100%,阳性预测值为100%,但敏感度较低,仅为63%,阴性预测值为82%。可见,当外周血T-SPOT. TB及脑脊液IFN-γ检测均阴性时有助于排除TBM,当二者均阳性时有助于明确TBM诊断。外周血T-SPOT. TB和脑脊液IFN-γ检测的总一致性为中度(K=0.44)；在结核性脑膜炎组,外周血T-SPOT. TB和脑脊液IFN-γ检测的一致性较差(κ=0.27),一致程度不够理想；在对照组中外周血T-SPOT. TB和脑脊液IFN-γ检测的结果很不一致(K=-0.15)。 [结论]用ELISA法检测脑脊液中未受刺激的IFN-γ是诊断TBM的一种较为快速、经济、敏感性高的诊断方法,动态观察其含量变化对TBM患者的病情监测具有重要意义。外周血T-SPOT. TB对TBM的诊断也具有重要的意义。外周血T-SPOT. TB及脑脊液中IFN-γ联合检测可以提高TBM的诊断效率。两种诊断试验至少有一项阳性时诊断TBM较检测单一诊断试验更敏感,两种诊断试验均阳性时诊断TBM较单一诊断试验更特异。可见,当外周血T-SPOT. TB及脑脊液IFN-γ检测均阴性时有助于排除TBM,当二者均阳性时有助于明确TBM诊断。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：复旦大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R529.3

【参考文献】