日月贝多糖联用吡喹酮对血吸虫肝纤维化的干预及机制研究

发布时间：2018-04-17 04:26

本文选题：日月贝多糖 + 血吸虫　；参考：《皖南医学院》2017年硕士论文

【摘要】：目的:初步分析日月贝多糖的结构并探讨其联用吡喹酮对血吸虫肝纤维化形成的干预及其机制。方法:1.日月贝多糖(APS)粗提物经DEAE分离得到其主要组分APS1,再经S-400对其进行纯化,得到高纯度的APS1-1组分。2.采用PMP柱前衍生法检测APS1-1的单糖组成,凝胶排阻法分析其分子量。3.50只雌性BALB/c小鼠(6～8周龄)随机分成五组,每组10只;APS组(A组):以APS200mg/(kg·d)(溶于1mL生理盐水中)的剂量灌胃8w;吡喹酮组(B组):先给予吡喹酮500mg/(kg·d)(溶于1mL生理盐水中)的剂量灌胃2d,再给予1mL生理盐水灌胃8w;APS+吡喹酮组(C组):给予吡喹酮500mg/(kg·d)的剂量灌胃2d,再给予APS200mg/(kg·d)灌胃8w;生理盐水组(D组):给予1mL生理盐水灌胃8w;正常对照组(E组)。A～D组给药前先以日本血吸虫尾蚴30±2条/只经腹部皮肤攻击感染小鼠8周;E组小鼠不感染血吸虫尾蚴,作为健康对照组。4.灌胃8周后处死小鼠,收集血清,用ELISA法检测血清白介素(interleukine,IL)-12、干扰素(interferon,IFN)-γ、IL-5、IL-13、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和透明质酸酶(Hyaluronidase,HA)含量;取肝组织,HE染色观察其纤维化程度,免疫组化观察肝组织中Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅳ型胶原蛋白的表达。结果:1.PMP柱前衍生法检测结果表明,APS1-1主要由葡萄糖组成,其摩尔比重约为64.5%,此外,还含有少量甘露糖、半乳糖和氨基葡萄糖;凝胶排阻法分析结果表明,APS1-1的分子量为11.7kDa。2.HE染色结果表明,E组肝组织细胞形态正常且结构完整;血吸虫感染后,D组的肝组织出现大量的肉芽肿和虫卵结节,肝细胞受挤压并破坏严重,且纤维化程度高度增生(3级);分别给予APS(A组)或吡喹酮(B组)后,肝组织中的虫卵结节数量减少,且纤维化程度为2级;而APS+吡喹酮联合用药后(C组),与D组相比,小鼠肝组织纤维化程度明显减轻(P0.05)。3.ELISA法检测各组小鼠血清的细胞因子结果表明:对于IL-12,E组血清IL-12水平为156.00±34.09pg/mL,D组血清IL-12水平为115.76±11.3pg/mL,A组血清IL-12水平为234.55±21.57 pg/mL,B组血清IL-12水平为243.66±18.69 pg/mL,C组血清IL-12水平为289.04±20.10pg/mL。与D组相比,A、B和C组的IL-12水平明显升高(P0.01);而C组IL-12水平也显著高于A组和B组(P0.01)。对于IFN-γ,E组血清IFN-γ水平为8.28±3.41 pg/mL,D组血清IFN-γ水平为21.87±7.48pg/mL,A组血清IFN-γ水平为60.40±11.45pg/mL,B组血清IFN-γ水平为55.08±11.21pg/mL,C组血清IFN-γ水平为66.21±11.57pg/mL。与D组相比,A、B和C组的IFN-γ水平明显升高(P0.01);而C组IFN-γ水平也显著高于B组(P0.05)。对于IL-5,D组血清IL-5水平为82.28±12.37pg/mL,A组血清IL-5水平为34.66±9.98 pg/mL,B组血清IL-5水平为33.05±8.23 pg/mL,C组血清IL-5水平为229.63±8.60pg/mL。与D组相比,A、B和C组的IL-5水平明显降低(P0.01)。对于IL-13,E组血清IL-13水平为20.57 ±4.11 ng/L,D组血清IL-13水平为94.27± 9.76 ng/L,A组血清IL-13水平为61.88 ± 5.47 ng/L,B组血清IL-13水平为75.22 ±8.73 ng/L,C组血清IL-13水平为55.27±10.51 ng/L。与D组相比,A、B和C组的IL-13水平明显降低(P0.01);而C组IL-13水平也显著低于B组(P0.01)。4.ELISA法检测各组小鼠血清的酶含量结果表明:对于SOD,E组血清SOD水平为6.82±2.52ng/mL,D组血清SOD水平为7.13±2.16ng/mL,A组血清SOD水平为9.70±2.50ng/mL,B组血清SOD水平为8.53±2.67ng/mL,C组血清SOD水平为13.15±3.39ng/mL。与D组相比,C组的SOD水平明显升高(P0.01);而C组SOD水平也显著高于A组(P0.05)和B组(P0.01)。对于HA,E组血清HA水平为835.36±130.48 pg/mL,D组血清HA水平为1796.80±356.71pg/mL,A组血清HA水平为1347.2±134.67pg/mL,B组血清HA水平为1148.41±170.11pg/mL,C组血清HA水平为953.11±68.73pg/mL。与D组相比,A、B和C组的HA水平明显降低(P0.01);而C组HA水平也显著低于A组(P0.01)和B组(P0.05)。5.免疫组化检测Ⅰ、Ⅱ和Ⅳ型胶原蛋白表达的结果表明,对于Ⅰ型胶原蛋白,E组肝组织中未见表达,D组肝组织中Ⅰ型胶原表达明显增多,而A组和B组肝组织中的Ⅰ型胶原表达显著低于D组(P0.01),但经APS联用吡喹酮联合给药后,Ⅰ型胶原表达明显比A组、B组和D组减少(P0.01)。Ⅱ和Ⅳ型胶原蛋白的表达趋势与Ⅰ型胶原表达相似。结论:PMP柱前衍生法检测出APS1-1主要由葡萄糖组成,凝胶排阻法分析其分子质量为11.7kDa。APS联用吡喹酮组IL-12和IFN-γ水平明显高于对照组,APS联用吡喹酮组IL-5和IL-13水平明显低于对照组,APS联用吡喹酮组TH2型免疫反应明显偏向于TH1型免疫反应;Ⅰ型胶原蛋白表达情况,APS组和吡喹酮组肝组织中的Ⅰ型胶原表达显著低于对照组,但经APS联用吡喹酮给药后,Ⅰ型胶原表达明显比APS组、吡喹酮组和对照组减少,Ⅱ和Ⅳ型胶原蛋白的表达趋势与Ⅰ型胶原表达相似。说明APS联用吡喹酮对血吸虫诱导的慢性肝纤维化具有明显的抑制作用。
[Abstract]:Objective : To investigate the structure of polysaccharide in rats and to explore its mechanism and its mechanism . Methods : 1 . The crude extract of APS was divided into five groups by DEAE - separation , then it was purified to obtain high - purity APS1 - 1 . The levels of IL - 12 in group A , B and C were significantly higher than those in group D ( P < 0.01 ) . The levels of IL - 12 in group A , B and C were significantly higher than those in group D ( P < 0.01 ) . The levels of IL - 12 in group A , B and C were significantly higher than those in group D ( P < 0.01 ) . Compared with group D , the levels of serum SOD in group A , group B and group C were significantly lower than those in group A ( P0.01 ) . The levels of serum SOD in group A , group B and group C were significantly lower than those in group A ( P0.01 ) .

【学位授予单位】：皖南医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R532.21;R575.2

【参考文献】