登革热不同基因型及登革与寨卡血清抗体交叉反应特征

发布时间：2018-05-27 04:29

  本文选题：登革病毒 + 寨卡病毒　； 参考：《广州医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：研究背景2014年广东省爆发了1型登革热疫情,2015年出现了2型登革病毒(DENV2)流行。2016年,随着寨卡病毒(ZIKV)在美洲地区爆发流行,中国也发现了输入性病例。目前认为ADE效应是重症登革发生的重要风险因素,但DENV或ZIKV感染后宿主的免疫状况仍不清。登革病毒共有四种血清型(DENV1-4),同一血清型因病毒株序列的差异又可被分为不同的基因型。我们的前期研究发现2014年爆发的登革热疫情中有两种不同的基因型同时流行,不同的基因型间是否存在血清抗体的交叉反应?新发的ZIKV感染常与DENV出现在同一地区。ZIKV在序列和结构上与DENV有高度同源性,其中DEVN2 E蛋白序列与ZIKV一致性高达54%,这种高度同源性可引起免疫学上的交叉反应。研究内容及目的本文首先探讨DENV1血清型不同基因型感染机体后血清抗体的产生,揭示登革热同一血清型不同基因型间血清抗体交叉反应的变化;并进一步以2015年潮州地区DENV2病人及本院收治的ZIKA病人为研究对象,分析登革热和寨卡病毒诱导宿主抗体产生及交叉反应的特征。研究方法1.DENV1,2型及ZIKV重组E蛋白质粒的构建及蛋白表达C端带标签的DENV1(GenotypeⅣ和GenotypeⅠ)、DENV2和ZIKA重组E蛋白的表达采用哺乳动物细胞表达体系。从病人急性期血清提取病毒RNA,用RT-PCR法或两步PCR法扩增病毒E蛋白膜外区,克隆到质粒pc DNA 3.1构建表达质粒。经序列验证的质粒转染293T细胞,收获含重组E蛋白的细胞上清,直接进行下一步捕获ELISA。2.捕获ELISA的建立用抗标签的抗体捕获293T细胞转染上清中的E蛋白,建立捕获ELISA法。3.血清抗体与重组病毒E蛋白结合分析1)用建立的ELISA法检测36例DENV1感染者病程不同时期血清与GenotypeⅣ、GenotypeⅠE蛋白的结合反应,血清样品以1:1000稀释开始,10倍系列稀释,共5个稀释度。2)30例DENV2感染者和3例ZIKV感染者血清抗体分别与ZIKV,DENV1和DENV2E蛋白结合反应。血清样品以1:100稀释开始,3倍系列稀释,共8个稀释度。研究结果1.成功构建ZIKV,DENV1和DENV2重组E蛋白表达质粒,并经序列验证,表达蛋白大小约56KD。以表达的E蛋白建立了可用于血清抗体检测的捕获ELISA法。2.在检测的36例DENV1型病例中,病程不同时期的血清与GenotypeⅣ和GenotypeⅠE蛋白均有明显的结合反应,在病程后期血清表现更强的抗体结合反应(P=0.038)3.在检测的30例DENV2型住院病例中,大部分病例(24/30)血清与DENV1和ZIKV E蛋白有明显的结合反应,表现为3种不同的结合形式,DENV1ZIKA(4/30),DENV1ZIKA(11/30)和DENV=ZIKA(9/30)。在检测的3例ZIKV血清中,有两例在急性期及恢复期均呈很强的抗体反应,且与DENV1和DENV2有明显交叉。结论1.成功在哺乳动物细胞体系表达重组E蛋白,并建立了可用于血清抗体检测的捕获ELISA法。2.DENV1血清型不同基因型间均有抗体交叉结合反应,且随病程结合反应有增加的趋势。3.DENV和ZIKV均可诱导宿主血清抗体的产生,且呈高度的交叉反应特征。
[Abstract]:Background there was a dengue type 1 outbreak in Guangdong province in 2014 and a dengue virus type 2 (DENV2) epidemic in 2015. In 2016, with the outbreak of Zika virus ZIKV in the Americas, imported cases were also found in China. ADE effect is considered to be an important risk factor for severe dengue, but the host immune status after DENV or ZIKV infection is still unclear. There are four serotypes of dengue virus (DENV1-4), and the same serotype can be divided into different genotypes because of the different sequences of the virus strains. Our previous study found that there were two different genotypes in the dengue outbreak in 2014. Are there cross-reactions between different genotypes? The new ZIKV infection often appears in the same region as DENV. ZIKV has high homology with DENV in sequence and structure, and the sequence of DEVN2 E protein is as high as 54% with ZIKV. This high homology can cause cross-reaction in immunology. Objective to investigate the production of serum antibodies after infection with different genotypes of DENV1 serotypes, and to reveal the changes of serum antibody cross-reactions among different genotypes of dengue fever. The characteristics of host antibody production and cross reaction induced by dengue fever and Zika virus were analyzed with DENV2 patients and ZIKA patients in Chaozhou area in 2015. Methods 1. Construction of recombinant E protein particles and expression of C-terminal tagged DENV1(Genotype 鈪，

本文编号：1940432