肝再生增强因子在HBV相关慢加急性肝功能衰竭中的表达及其启动子区基因多态性分析

发布时间：2018-05-30 11:49

  本文选题：乙型肝炎病毒 + ACLF　； 参考：《泸州医学院》2013年硕士论文

【摘要】：研究目的：1、了解HBV感染后不同程度肝功能损害患者ALR血清浓度变化及其临床意义。2、获得汉族人群ALR启动子区的SNP位点基因型。3、筛选出与ACLF有关启动子区SNP位点。4、检测SNP不同基因型间ALR血清浓度差异。对象方法：病例收集于2011年至今泸州医学院感染科门诊及住院的乙肝患者，包括慢性乙肝轻度（n=110例）和ACLF组（n=138例）以及健康对照组（n=120名），同时运用如下方法对各组标本进行如下实验：（1）ELISA检测：使用ELISA法检测各组ALR浓度，多组之间采用单因素方差分析，两组之间采用t检验。(2)全血DNA提取、电泳、PCR及测序：待检的EDTA抗凝全血标本，置于37℃温箱迅速溶解，使用QiAampDNA Blood试剂盒提取全基因组DNA，并用紫外透射仪检测浓度与纯度，随之选取DNA标本进行PCR扩增，PCR产物送introvgen公司测序。（4）通过chromas软件读序列直接判定SNP基因型，卡方检验比较病例组和对照组之间SNP基因型频率统计学差异；秩和检验分析SNP不同基因型与ALR表达的关系；LD筛选与ACLF有关的ALR启动子区SNP位点，计算连锁不平衡系数D与D’值. D值代表实际情况中单体型分布频率与单体型分布频率之间的差异。D’值则是经标准化的D值，范围在0到1之间；D’=0表示位点之间不存在连锁；D’=1表示存在完全连锁；"#D’"#l表示存在连锁不平衡。 结果：1、 ALR水平在ACLF组明显高于健康对照组（2.58±1.67vs0.72±0.29,p0.01）。慢乙肝轻度组ALR水平与健康对照组相比无明显统计学差异（0.74±0.46vs0.72±0.29，P=0.813）,在ACLF血清ALR水平在生存组明显高于死亡组（7.78±1.75vs2.10±1.50，t=7.479,p0.01）。多因素logistic分析结果表明：在校正了性别、年龄的混杂因素后，P=0.000，OR值为0.003，95%（0.000,0.034）说明高浓度ALR对于生存组患者是保护性因素，提示ACLF患者血清高ALR浓度与较好预后有相关性。2、ALR基因启动子区SNPs位点在138名ACLF患者，110例慢乙肝轻度患者和120名健康献血员正常对照中成功进行了分型，结果显示：各ALR的SNP位点在健康对照组、慢乙肝轻度组及ACLF组各基因型分布无明显统计学意义（P0.05），ALR-847A/G、-393A/G和-80G/A位点基因型在ACLF组和健康对照组中均有明显差异(P0.05)。经多因素Logistic回归分析校正年龄、性别等因素后：ALR-80G/A位点与ACLF显著关联。-80G/A为ACLF的影响因素，GA基因型携带者为ACLF患病的危险因素，携带GA基因型的个体患病的可能性为GG基因型携带者的1.788倍（P=0.028）3、ACLF患者SNP各突变位点不同基因型ALR值经秩和检验分析，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：我们通过病例对照研究证实了ALR基因多态性与ACLF的关联，ACLF患者ALR浓度与其它组相比明显升高，，血清ALR高水平预示ACLF预后良好。-80G/A位点与ACLF显著关联，GA基因型与其它基因型相比，GA基因型的个体对ACLF易感性显著升高。ACLF的ALR启动子区SNP不同基因型间ALR血清浓度无明显统计学差异。
[Abstract]:Objective: to investigate the changes of serum ALR concentration and its clinical significance in patients with liver function damage after HBV infection, and to obtain the genotype of SNP locus .3in the ALR promoter region of Han population, and to screen out SNP locus .4in the promoter region associated with ACLF. The serum concentrations of ALR among different genotypes of SNP were detected. Methods: the patients with hepatitis B were collected from 2011 to present in the Department of infection, Luzhou Medical College. There were 110 cases of chronic hepatitis B and 138 cases of ACLF group (n = 138) and a healthy control group (n = 120). At the same time, the following methods were used to detect the ALR concentration in each group: ELISA method was used to detect ALR concentration in each group, and univariate analysis of variance (ANOVA) was used among groups. The whole blood DNA was extracted by t test, electrophoresis and sequencing. The whole blood samples of EDTA anticoagulant were dissolved rapidly at 37 鈩

本文编号：1955198