基于多色流式细胞术的结核病患者T细胞亚群研究

发布时间：2018-06-16 03:45

  本文选题：多色流式细胞术 + T细胞亚群　； 参考：《扬州大学》2017年硕士论文

【摘要】：结核病仍然是严重威胁人类健康的全球性疾病,伴随着耐药菌株的出现和快速传播,以及卡介苗预防保护能力有限,使得结核病一直保持着较高的发病率,全球发病形势仍然严峻。我国是结核病高负担国家之一,结核病始终威胁着公众的健康安全,加强对结核病全身免疫的探索,能够深入了解结核病发生发展的免疫机制,加快推动结核病的研究与治疗手段的发展。流式细胞术具有快速、精准、多细胞因子检测等特点,随着流式细胞术的发展,系统研究结核病患者的免疫状态成为了可能。本研究基于流式细胞术,成功建立了一套精准分析T细胞亚群的复杂多色流式细胞术实验方案,并以其为基础系统分析了结核病患者T淋巴细胞亚群的变化特征。1基于多色流式细胞术检测T细胞亚群方法的建立根据研究要求,确定T细胞亚群染色需要的表面分子种类,经过摸索与测试,调整荧光抗体的荧光搭配与用量,再经不断优化方案,最终建立了一套染色效果好,结果稳定的T细胞亚群表面分子染色实验方案,通过该方案可以清楚的区分结核病患者外周血中αβT细胞(CD3+TCRαβ+)、γδT 细胞(CD3+TCRαβ-)、CD4+T 细胞(CD3+TCRαβ+CD4+CD8-)、CD8+T 细胞(CD3+TCRαβ+CD8+CD4-)、Th 细胞(CD3+TCRαβ+CD4+CD8-CD127+CD25-/low)、Treg细胞(CD3+TCRαβ+CD4+CD8-CD127-CD25+)等多种细胞亚群,并且能区分中央记忆T细胞(CCR7+CD45RA-Tcm)和效应记忆T细胞(CCR7-CD45RA-Tem)两种功能亚群。2结核病患者外周血中T细胞亚群研究按照成功建立的多色流式细胞术实验方案,对40例临床确诊的结核病患者与26例非感染对照样本进行了T细胞亚群变化的研究。结果显示,结核病患者组与对照组相比,T细胞总数、αβT细胞、黏膜相关恒定T细胞(MAIT)、Vδ1+γδT细胞、辅助性T细胞(Th)、调节性T细胞(Treg)等细胞群的数量无明显差异;γδT细胞、Vδ2+γδT细胞、CD8+T细胞等细胞群的数量显著下降,而CD4+T细胞亚群数量显著增多;中央记忆T细胞(Tcm)、效应记忆T细胞(Tem)亚群无显著差异。以上结果显示,结核病患者的T细胞亚群发生了广泛的变化,多种细胞参与了结核免疫应答。本研究促进了结核病全身免疫的研究,加深了对结核病免疫应答的认识。3结核病追踪样本T细胞亚群研究对结核病患者进行6个月追踪研究,共有12个患者完成了完整的追踪。追踪研究结果显示,这些患者接受治疗后健康状况均持续得到改善,T细胞总数持续减少,但无显著差异;γδT细胞数量0-3个月间增加,3个月后有所降低,但整体水平仍然高于初发水平;αβT细胞数量0-3个月间减少,3-6个月间小幅增多,同时,其CD4+T、CD8+T细胞亚群数量变化趋势与之相同。Treg细胞亚群数量在0-3个月间持续升高,3-6个月间略有降低。CD4+T细胞的主要功能亚群为Tcm,在治疗后其百分比持续降低;CD8+T细胞的主要功能亚群为Tem,治疗后其百分比持续升高。对结核病抗原特异性IFN-γ+T细胞以及IFN-γ+TNF-α+多功能T细胞亚群的研究发现,这些特异性T细胞的数量在患者接受治疗后持续减少,提示与患者的健康状况有紧密的联系,这将有利于加深对结核病免疫应答变化的理解,有助于探寻新型结核病诊断指标与愈后评价指标。
[Abstract]:T lymphocyte subsets in peripheral blood of tuberculosis patients were studied by flow cytometry . The results showed that the number of CD4 + T cells continued to decrease from 0 to 3 months and the percentage of CD8 + T cells was decreased after 3 months .
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R52

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本文编号：2025145