琼脂磁珠核酸信标配基HBsAg诊断试剂盒的研制
本文选题：琼脂磁珠 + 核酸信标配基 ； 参考：《兰州大学》2017年硕士论文
【摘要】：建立羧基琼脂磁珠核酸信标配基HBsAg诊断试剂盒,提高乙肝疾病的早期诊断率,为疾病的治疗提供帮助。本实验以羧基琼脂磁珠为载体,以小鼠IgG的Fc核酸信标配基为检测分子以山羊抗人的乙肝多抗为捕捉体,以HBsAg为靶蛋白,形成磁珠-多抗-抗原-单抗-配基信标复合物,建立了双抗夹心免疫-PCR检测技术。结合全自动核酸提取仪,研制出试剂盒。免疫-PCR检测的结果显示,检测阈值为105~108拷贝数,蛋白浓度为10-3~10-6mg/mL有良好的线性关系,重复率为97%,具有实际检测意义。由此得出:双抗夹心免疫-PCR检测技术结合全自动核酸提取仪可以准确地检测靶标蛋白,比传统ELSIA的检测灵敏度高出103倍,说明基于琼脂磁珠的核酸信标配基双抗夹心免疫-PCR检测技术建立成功,琼脂糖核酸信标配基HBV诊断试剂盒建立成功。该试剂盒具有特异性强、灵敏度高、重复性好、人为误差小、机械化程度高等优点。因此,在临床上对乙肝病毒感染的早期诊断和治疗具有重要的意义。
[Abstract]:The HBsAg diagnostic kit of carboxyl agar magnetic bead nucleic acid beacon ligand was established to improve the early diagnosis rate of hepatitis B disease and provide help for the treatment of disease. This experiment uses carboxyl agar beads as the carrier and the Fc nucleic acid beacon of mouse IgG as the detection molecule with the anti human hepatitis B multi resistance as the capture body and the HBsAg as the target protein to form the magnetic beads. Multi anti antigen monoclonal antibody complex beacon complex, a double anti sandwich immunization -PCR detection technique was established. Combined with automatic nucleic acid extraction instrument, a kit was developed. The result of immune -PCR detection showed that the detection threshold was 105~108 copy number, and the protein concentration was 10-3~10-6mg/mL with good linear relationship, and the repetition rate was 97%, and it was of practical significance. It is concluded that the dual anti sandwich -PCR detection technique combined with the automatic nucleic acid extraction instrument can accurately detect the target protein, which is 103 times higher than the traditional ELSIA detection sensitivity. It shows that the nucleic acid beacon based dual anti sandwich immunization -PCR detection technology based on agar magnetic beads has been established successfully, and the agarose nucleic acid beacon ligand HBV diagnostic kit is established. This kit has the advantages of strong specificity, high sensitivity, good repeatability, small human error and high degree of mechanization. Therefore, it is of great significance to the early diagnosis and treatment of HBV infection in clinic.
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R512.62
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，本文编号：2111105
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