替比夫定对大鼠肾小球系膜细胞血管紧张素Ⅱ 1a受体表达的影响

发布时间：2018-08-20 17:32

【摘要】：背景乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染引发的慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB),已经成为危害全球人类健康的主要传染病之一。目前,控制HBV诱导的肝脏损伤已经成为我们的紧要任务和最终目标,而有效的抗病毒药物是我们达到最终目标的桥梁。替比夫定(telbivudine,L-DT)从2006年研发以来,作为一种核苷(酸)类似物(nucleos(t)ide analogs,NAs)被应用到抗HBV治疗CHB中。全球多中心研究显示对CHB伴轻度肾功能不全的患者,在经过L-DT抗HBV治疗48周以上,肾小球滤过率(glomerular filtration rate,GFR)较基线水平显著升高,但具体作用机制尚不明确。目的探究L-DT对大鼠肾小球系膜细胞(rat mesangial cells,RMCs)的增殖有无影响,进一步研究L-DT对RMCs上与肾小球血流量以及滤过功能密切相关的血管紧张素Ⅱ1a受体(Angiotensin type 1a receptor,ⅡAT1aR)在表达上是上调还是下调。为进一步研究L-DT提高患者肾小球滤过功能可能的相关分子机制,提供一定的实验依据。方法体外经消化、传代常规培养后,选用处于对数生长期的RMCs进行实验。计数RMCs 5×104个/mL,按每孔100ul体积内含5000个RMCs,均匀接种于3块96孔细胞培养板内。依据L-DT药物浓度的不同设立空白对照组(L-DT 0mmol/L)和实验组(L-DT 1、10、40、60、100、150mmol/L),对RMCs分别作用24、48、72h。随后采用4-甲基偶氮唑蓝(thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测不同药物浓度作用不同时间后细胞的吸光度(optical density,OD),计算出L-DT对RMCs增殖半数抑制的药物浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。通过半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)检测空白对照组以及根据IC50而设立的L-DT低(10mmol/L)、中(50mmol/L)、高(100mmol/L)三个不同浓度组RMCs上AT1aRmRNA表达量的情况。将半定量RT-PCR产物进行凝胶电泳成像,选用β-actin为内参,应用Image-J软件对条带灰度值进行测量,用AT1aR/β-actin的灰度值比值表示AT1aRmRNA相对表达量。数据录入SPSS 19.0统计软件分析。本实验数据为计量资料以均数±标准差(x±s)表示,方差的齐性检验用Levene检验法,组间比较使用ANOVA方差分析,P0.05为差异有统计学意义。结果L-DT实验组中的RMCs随药物浓度以及作用时间的增加出现皱缩,核缩成点状,甚至有胞质空泡。MTT法提示实验组中RMCs经不同L-DT浓度(1、10、40、60、100、150mmol/L)作用24、48、72h后,通过计算增殖抑制率(Inhibition rate,IR%),发现L-DT组IR%均高于空白对照组(P0.05)。测得RMCs经L-DT在浓度为100mmol/L作用48h后对细胞的IR%达到50%。半定量RT-PCR结果显示,L-DT低(10mmol/L)、中(50mmol/L)、高(100mmol/L)三组与空白对照组相比均下调RMCs上AT1aRmRNA的表达(P0.05),且高剂量组对AT1aRmRNA表达的下调作用更显著(P0.05)。结论1.L-DT对RMCs的增殖有抑制作用,且呈时间和浓度依赖性。2.L-DT下调了RMCs上AT1aRmRNA的表达。3.L-DT可能是通过抑制患者肾小球系膜细胞上AT1aRmRNA的表达,来提高其GFR的水平。
[Abstract]:Background: chronic hepatitis B virus (chronic hepatitis) caused by hepatitis B virus (hepatitis B) infection has become one of the major infectious diseases in the world. At present, the control of HBV induced liver damage has become our urgent task and final goal, and effective antiviral drugs are the bridge to achieve our ultimate goal. Since its development in 2006, telbivudine L-DT has been used as a nucleoside analogue (nucleos (t) ide analogs in the treatment of CHB. Global multicenter study showed that the glomerular filtration rate (GFR) of CHB patients with mild renal insufficiency was significantly higher than that of baseline after 48 weeks of L-DT anti-HBV treatment, but the specific mechanism was not clear. Objective to investigate the effect of L-DT on the proliferation of rat Mesangial cells (rat mesangial cells). To further investigate whether L-DT up-regulates or down-regulates the expression of angiotensin 鈪，

本文编号：2194434