慢性乙型肝炎病毒感染患者胞穿梭素4启动子区甲基化状态的研究

发布时间：2018-10-13 12:20

【摘要】：背景与目的 胞穿梭素4(Exportin4, XP04)是β核转运蛋白家族中的一员,负责多种蛋白质和因子在胞浆和胞核之间的运输。XP04做为一种新近确定的抑癌基因已被确定与原发性肝癌(primary liver cancer, PLC)的发病有关,并有研究证实XP04的表达下降与原发性肝癌患者的预后不良相关。然而,XP04在慢性乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus, HBV)感染的相关疾病进展中的表达情况尚不明确。因此,本研究的目的是探讨慢性HBV感染患者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)中XP04的mRNA表达水平和DNA启动子甲基化状态的临床特点。 方法 我们选取了慢性乙型病毒性肝炎(chronic hepatitis B, CHB)患者、肝硬化(liver cirrhosis, LC)患者、原发性肝癌患者及健康对照者来作为慢性乙型肝炎病毒感染的一个横断面,以代表慢性乙型肝炎病毒感染的疾病进展过程。2011年8月至2012年7月期间于山东大学齐鲁医院肝病科收集CHB患者34例、LC患者38例及原发性肝癌患者44例。CHB患者及LC患者均符合美国肝脏疾病研究学会(American Association for the Study of Liver Diseases, AASLD)关于慢性乙型肝炎管理实践指南(2009年更新版)中的诊断标准,其中肝硬化患者根据Child-Pugh分级系统,可分为A级9例,B级13例,C级16例。原发性肝癌患者符合AASLD关于肝癌管理实践指南(2010年更新版)中的诊断标准。17例健康体检者作为正常对照组。 收集以上病例及健康对照组的临床资料：一般资料包括年龄、性别,实验室检查包括肝功能检测、凝血功能检测、乙肝五项定量／定性检测、乙肝病毒DNA定量检测、甲胎蛋白(α-feto protein, AFP)定量检测,影像学检查包括B型超声检查(B-ultrasound,B超)、CT(computed tomography)MRI(Magnetic Resonance Imaging)等。 手工法提取患者及正常对照者外周血单个核细胞中的总RNA及DNA。反转录RNA为cDNA后通过实时定量荧光PCR测定PBMCs中XPO4mRNA的水平,以反映XP04的表达情况。DNA通过重亚硫酸盐处理后进行甲基化修饰,应用M3thPrimer软件设计甲基化特异性引物,后进行甲基化特异性PCR(methylat ion specific polymerase chainreaction, MSP),以确定患者XP04启动了区域甲基化的情况。 结果 1.XP04的mRNA水平随HBV感染的进展而降低。XPO4mRNA的表达水平在四组中有明显差异(原发性肝癌患者vs.肝硬化患者,P=0.003；原发性肝癌vs.慢性乙型肝炎患者,P=0.001；原发性肝癌患者vs.健康对照,P=0.000；肝硬化患者vs.健康对照,P=0.004；慢性乙型肝炎患者vs.健康对照,P=0.011；肝硬化患者vs.慢性乙型肝炎患者,P=0.943),且与年龄呈明显负相关(R=-0.377,P＜0.0001)。 2.XP04启动子区的甲基化率随着HBV感染的进展而升高,并与mRNA表达水平的下降有关。XP04启动子的甲基化率在肝癌患者与CHB患者、正常对照之间有统计学差异(原发性肝癌患者63.6%vs.肝硬化患者47.4%,P=0.182；原发性肝癌患者63.6%vs.慢性乙型肝炎患者26.5%,P=0.01；原发性肝癌患者63.6%vs.健康对照17.6%。P=0.02),在肝硬化患者与正常对照之间也有统计学差异(肝硬化患者,17.4%vs.健康对照17.6%,P=0.042；肝硬化患者47.4%vs.慢性乙型肝炎患者26.5%,P=0.089；慢性乙型肝炎患者26.5%vs.健康对照17.6%,P=0.728)。相关性分析表明,在慢性HBV感染的疾病进展过程中,DNA甲基化在抑制中XP04的转录中发挥着作用(P=0.000)。 3.XP04启动子区发生甲基化的肝癌患者与未发生甲基化的肝癌患者相比,前者血清AFP水平明显升高((8702±15635)ng/ml vs.(1052±5370)ng/ml,P＜0.05)。将XP04启动子甲基化情况的检测与AFP检测相结合可以提高对肝癌的检出率和特异性。 结论 我们的结果表明,随着慢性HBV感染疾病的进展,外周血单个核细胞中XP04mRNA水平逐渐下降,而XP04启动子的甲基化率逐渐增加。此外,将XP04启动子甲基化情况的检测与AFP检测相结合可以提高对肝癌的检出率和特异性,这预示着外周血单个核细胞的XP04启动子的甲基化状态有可能可以作为一种非侵入性的生物标志物来预测肝癌与HBV感染的进展。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R512.62

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本文编号：2268603