NK细胞活化信号转导途径中KCTD9与SHB的作用研究

发布时间：2018-10-16 22:16

【摘要】：【研究背景及目的】 在各种病因所导致的肝损伤中，机体免疫介导所致肝细胞损伤占有重要的地位，尽管具体机制复杂，但免疫细胞的活化均是其始动因素。本研究室的前期数据首次阐述了NK细胞在病毒诱导的重度肝细胞损伤中至关重要。通过对比研究重型乙型肝炎和轻中度慢性乙型肝炎患者的基因表达谱，发现钾离子通道相关基因KCTD9的表达与疾病的严重程度即肝损伤的程度高度正相关，在重型肝炎患者淋巴细胞胞核中该分子高度表达。进一步发现其表达主要在重型肝炎患者肝组织和外周血NK细胞。初步体外实验结果的显示，该分子的高表达与NK细胞的活化和功能具有紧密联系[1-3]。通过生物信息学分析发现，该分子与新型接头蛋白SHB分子具有紧密功能关联，而SHB分子与IL-2受体信号途径和PI3K途径相关[4]。据此我们提出KCTD9分子可能是NK免疫细胞活化过程中的关键分子之一，并可能通过SHB蛋白参与免疫细胞活化过程。本研究针对KCTD9和SHB基因构建相对应的标签质粒，通过体外实验验证KCTD9分子和SHB分子之间是否存在功能关联，，为进一步揭示NK细胞及其表达的KCTD9分子在重型乙型肝炎肝损伤发生和发展中的作用及其作用机制奠定基础。 【研究方法】 利用分子克隆技术构建在氨基端含有His标记的His-KCTD9融合蛋白载体pHis-KCTD9和在氨基端含有FLAG标记的FLAG-SHB融合蛋白载体pFLAG-SHB,采用HEK293T细胞、jurkat细胞及NK92细胞共转染和免疫共沉淀法验证KCTD9与SHB分子的相互作用。 【研究结果】 成功构建了氨基端含有His标记的His-KCTD9融合蛋白载体pHis-KCTD9和在氨基端含有FLAG标记的融合蛋白FLAG-SHB的载体pFLAG-SHB。成功共转染HEK293T细胞、jurkat细胞及NK92细胞后，采用免疫共沉淀法发现KCTD9与SHB分子无结合。 【研究结论】 成功构建了pHIS-hKCTD9和pFLAG-hSHB真核表达质粒，通过体外实验初步推断：KCTD9蛋白与SHB蛋白之间不存在直接相互作用。鉴于此KCTD9究竟是通过与哪一种蛋白分子的相互作用发挥其免疫学功能值得进一步研究。
[Abstract]:Background and objective: immune mediated hepatocyte injury plays an important role in liver injury caused by various etiology. Although the specific mechanism is complicated, the activation of immune cells is the initiator of liver injury. The preliminary data of this study demonstrated for the first time the importance of NK cells in viral induced severe hepatocyte injury. By comparative study of gene expression profiles in patients with severe hepatitis B and mild to moderate chronic hepatitis B, it was found that the expression of potassium channel associated gene KCTD9 was highly positively correlated with the severity of the disease, that is, the degree of liver injury. This molecule is highly expressed in lymphocyte nuclei of patients with severe hepatitis. It was further found that its expression was mainly in NK cells of liver and peripheral blood of patients with severe hepatitis. The results of in vitro experiments showed that the overexpression of this molecule was closely related to the activation and function of NK cells [1-3]. Through bioinformatics analysis, it was found that this molecule is closely related to the SHB molecule, while the SHB molecule is related to the IL-2 receptor signaling pathway and the PI3K pathway [4]. Therefore, we suggest that KCTD9 may be one of the key molecules in the activation of NK immune cells, and may participate in the activation of immune cells through SHB protein. In this study, the corresponding tag plasmids of KCTD9 and SHB genes were constructed to verify whether there was a functional correlation between KCTD9 molecules and SHB molecules in vitro. In order to further reveal the role and mechanism of NK cells and their expressed KCTD9 molecules in the occurrence and development of liver injury in severe hepatitis B. the molecular cloning technique was used. Construction of His-KCTD9 fusion protein vector pHis-KCTD9 with His labeling at amino terminal and FLAG-SHB fusion protein pFLAG-SHB, labeled with FLAG at amino end using HEK293T cells, cotransfection of jurkat cells and NK92 cells and immunocoprecipitation method to verify the phase of KCTD9 and SHB molecules Interaction. [results] the vector pFLAG-SHB. containing His labeled His-KCTD9 fusion protein pHis-KCTD9 at amino terminal and FLAG-SHB labeled with FLAG at amino terminal was successfully constructed. After successful cotransfection of HEK293T cells, jurkat cells and NK92 cells, no binding between KCTD9 and SHB molecules was found by immunoprecipitation method. [conclusion] Eukaryotic expression plasmids of pHIS-hKCTD9 and pFLAG-hSHB were constructed successfully. Through in vitro experiments, we infer that there is no direct interaction between KCTD9 protein and SHB protein. Therefore, the immunological function of KCTD9 through interaction with which protein molecules is worthy of further study.
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R512.62

【共引文献】

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1 吴国才;杨志刚;王珍;吴祖常;熊丹;;CD158受体表位封闭对急性髓系白血病患者NK细胞杀伤活性的影响[J];广东医学院学报;2013年05期

2 叶珩;卢绪章;钱科卿;;化疗联合CIK细胞输注对老年淋巴瘤患者淋巴细胞亚群的影响[J];癌症进展;2013年06期

3 姜昱竹;胡雪梅;;sHLA-G与母胎免疫耐受[J];滨州医学院学报;2013年05期

4 唐冬梅;陈小明;毛德文;胡小慧;石文峰;;解毒化瘀Ⅱ方对急性肝衰竭大鼠肝组织TLR4蛋白及TBIL的影响[J];广西中医药;2013年06期

5 魏姗姗;佘妙容;彭琪;夏平方;;自然杀伤细胞在白血病免疫逃逸中的研究进展[J];广东医学;2013年22期

6 陈英杰;程晶;周大桥;贺劲松;;平和质慢性HBV携带者T淋巴细胞亚群及Th1/Th2型细胞因子分析[J];内蒙古中医药;2013年22期

7 刘娜娜;何韦韦;傅晓岚;谭文婷;罗晓丽;王莉;陈晓玲;邓国宏;;慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞表面HLA-Ⅱ分子表达模式研究[J];免疫学杂志;2014年03期

8 吕小婷;刘军权;周忠海;王涛;孙蕾清;张颂;童成刚;陈玲;陈复兴;;白藜芦醇增强人NK细胞杀伤肺癌细胞株A-549的体外研究[J];现代免疫学;2014年01期

9 王轩;周益;袁伟杰;朱楠;尚明花;赵亚鹏;王玲;谷立杰;;经HBx转染后的肾小管上皮细胞对T细胞激活、分化的影响[J];中华肾脏病杂志;2013年07期

10 李静;孙剑勇;;肝衰竭免疫学发病机制研究进展[J];肝脏;2013年06期

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1 李凤磊;肝脏抗病毒免疫应答及其调控机制[D];中国科学技术大学;2013年

2 欧阳礼辰;CD8~(low)T细胞群在慢性乙型肝炎感染病人中增多及人T细胞库中表位特异性单克隆TCR扩增技术的建立[D];华中科技大学;2013年

3 阿玛杜（AMADOU Ibrahim Halilou）;慢性HBV感染不同时期调节性T细胞的比例变化[D];华中科技大学;2013年

4 刘欣;CXCR1/CXCR2受体拮抗剂-G31P对前列腺癌的抑制作用及机制研究[D];大连医科大学;2012年

5 阳乔;单核/巨噬细胞在肝衰竭中的作用及调节机制研究[D];浙江大学;2013年

6 葛菁;免疫性血小板减少症遗传易感性的初步研究[D];北京协和医学院;2010年

7 何登明;慢性HBV感染不同临床表型的免疫因子表达模式及免疫遗传特征研究[D];第三军医大学;2013年

8 丁琳;自然杀伤细胞在病毒性肝衰竭中的作用及趋化机制研究[D];华中科技大学;2013年

9 杨潇瑾;MDSC在MHV-3诱导小鼠暴发性肝衰竭中的作用及作用机制[D];华中科技大学;2013年

10 李媛;慢性丙型肝炎抗病毒疗效及其与NK和特异性CD8~+T细胞活性的关系[D];华中科技大学;2013年

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1 钟大妮;广西地区乙肝病毒基因型与临床表现及机体免疫功能的关系[D];广西医科大学;2013年

2 李红玉;HLA-DRB1*07、11、14等位基因对广西乙肝相关性疾病病情的影响[D];广西医科大学;2013年

3 韦柯利;HLA-DRB1*09/12/15等位基因对广西HBV相关性肝病的影响研究[D];广西医科大学;2013年

4 黄雪新;IUGR对新生仔猪肝脾免疫功能的影响[D];南京农业大学;2011年

5 蒿姗姗;硼替佐米提高多发性骨髓瘤U266细胞对γ δ T细胞杀伤敏感性的研究[D];吉林大学;2013年

6 赵花;淋巴细胞免疫表型在原因不明复发性流产诊治中的应用价值探讨[D];暨南大学;2013年

7 李秋玲;新生儿细菌性肺炎外周血自然杀伤细胞的临床意义[D];福建医科大学;2013年

8 丁琴;NKG2D/MICA通路在原发性胆汁性肝硬化发病中的研究[D];昆明医科大学;2013年

9 田婷婷;羊口疮疫苗研制及其免疫效果评估[D];西北农林科技大学;2013年

10 高莹莹;NVP-BEZ235对CD34~+CD38~-髓系白血病干细胞的增殖抑制和免疫增敏[D];南方医科大学;2013年

本文编号：2275794